[发明专利]一种接近CIN患者血清HMGB-1含量的体外细胞培养方法

摘要

本发明公开了一种接近CIN患者血清HMGB‑1含量的体外细胞培养方法，包括如下步骤：(1)HK‑2细胞复苏；(2)传代培养；(3)细胞消化至观察到培养瓶内呈现沙粒样滑落时，离心，制成细胞重悬液；(4)将细胞重悬液转接入完全培养基中，接种密度为40％～50％，培养；(5)当细胞生长密度达80％～90％时，进行离心，制成细胞重悬液(细胞浓度为1.0～1.5*106个/ml)；(6)将制成的细胞重悬液，培养48h，换无血清培养基培养6h，然后加入浓度为45～55mgI/ml的碘克沙醇溶液，继续培养得到损伤模型细胞。本发明能够培养出与造影剂肾病患者术后血清HMGB‑1含量类似、损伤更接近、体系毒素更少的细胞损伤模型。 1

主权项

1.一种接近CIN患者血清HMGB‑1含量的体外细胞培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)HK‑2细胞复苏，将冻存管放在手心中先预热几秒，然后迅速投入到37℃的水浴箱中并不断摇动，待冻存管内的液体完全融化后，在300～500rmp下离心2～5min，离心完毕后，弃上清液，加入完全培养基，制成细胞重悬液；

(2)将步骤(1)制得的细胞重悬液在完全培养基内进行传代培养；

(3)细胞传代消化至观察到培养瓶内细胞随培养液呈现沙粒样滑落时，将培养液在950～1000rmp下离心4～6min，弃去上清液，加入完全培养基，制成细胞重悬液；

(4)将第(3)步骤中的细胞重悬液转接入新鲜完全培养基中，接种密度为40％～50％，置于培养箱中培养；

(5)当细胞生长密度达80％～90％时，将细胞培养液在900～1100rmp下离心4～6min，加入完全培养基，制成细胞重悬液(细胞浓度为1.0～1.9*10⁶个/ml)；

(6)将制成的细胞重悬液，按每50ul接种至2ml的新鲜完全培养基中，进行培养48h，换无血清培养基培养6h，然后加入浓度为45～55mgI/ml的碘克沙醇溶液，继续培养5～7h后得到损伤模型细胞。

2.根据权利要求1所述的一种接近CIN患者血清HMGB‑1含量的体外细胞培养方法，其特征在于，所述完全培养基为按10％FBS、1％双抗的比例配置。

3.根据权利要求1所述的一种接近CIN患者血清HMGB‑1含量的体外细胞培养方法，其特征在于，所述第(3)和第(5)步骤中的离心速度为1000rmp，时间为5min。

4.根据权利要求1所述的一种接近CIN患者血清HMGB‑1含量的体外细胞培养方法，其特征在于，所述第(5)步骤，制成的所述细胞重悬液其细胞浓度为1.875*10⁶个/ml或1.475*10⁶个/ml或1.125*10⁶个/ml或1.7*10⁶个/ml。

5.根据权利要求1所述的一种接近CIN患者血清HMGB‑1含量的体外细胞培养方法，其特征在于，所述第(6)步骤，加入的碘克沙醇溶液浓度为50mgI/ml。

6.根据权利要求1所述的一种接近CIN患者血清HMGB‑1含量的体外细胞培养方法，其特征在于，所述第(6)步骤，加入碘克沙醇溶液后，继续培养6h后得到损伤模型细胞。

7.根据权利要求1所述的一种接近CIN患者血清HMGB‑1含量的体外细胞培养方法，其特征在于，所述第(1)～(6)步骤中涉及到的细胞培养，培养条件为37℃、5％CO₂浓度培养箱中培养。