[发明专利]一种牙菌斑生物膜模型的培养方法和优化的生物膜活菌计数法及应用

摘要

本发明涉及口腔护理产品抗菌功效评价技术领域，具体为一种牙菌斑生物膜模型的培养方法、优化的生物膜活菌计数法及快速评价口腔护理产品抗菌功效的方法。本发明提供的牙菌斑生物膜模型的培养方法通过优化培养条件，能培养形成可提高对口腔护理产品抗菌功效评价准确度的牙菌斑生物膜模型。本发明提供的优化的生物膜活菌计数法可提高活菌计数结果，更加接近真实的生物膜上活体细菌的数目。本发明提供的快速评价口腔护理产品抗菌功效的方法，不仅检测结果较游离菌法更接近消费者实际使用后的评价结果，还能大幅减少口腔产品的功效评价耗时，从而可为快速区分口腔产品功效提供数据支持，并且重复性强，结果稳定性好；成本较低，培养条件容易满足。

主权项

1.一种牙菌斑生物膜模型的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：S101、在无氧气氛及恒温的环境中，分别对各种口腔致病菌在TSA补加培养基平板上划线培养2～6天至平板上出现大量菌苔；S102、将经步骤S101培养后的各种口腔致病菌分别接种到BHI富集培养基，在无氧气氛及恒温的环境中分别培养1～3天至BHI富集培养基浑浊，得到各种口腔致病菌的成熟菌悬液；S103、将步骤S102所得的各种成熟菌悬液添加到含附着力促进剂的BHI富集培养基中，每一种成熟菌悬液的体积百分比为2％～8％；然后在无氧气氛及恒温的环境中接种到成膜介质的孔中，培养14～18小时，在成膜介质的孔底上形成牙菌斑生物膜模型；所述TSA补加培养基是指每升TSA培养基中含有5克酵母提取物、0.5克L-半胱氨酸氨酸盐酸盐、5毫克氯化血红素和1毫克维生素K1的培养基；所述BHI富集培养基是指每升BHI培养基中含有1克蔗糖、1克葡萄糖、1克D-甘露糖、0.5克L-半胱氨酸氨酸盐酸盐、5毫克氯化血红素和1毫克维生素K1的培养基；所述附着力促进剂为碳酸钙悬浊液，含附着力促进剂的BHI富集培养基中碳酸钙的质量百分比为0.1％～0.5％。