[发明专利]一种痰液微生物宏基因组去宿主化提取和建库方法

摘要

本发明属于微生物分子生物学检测技术领域，具体公开了一种痰液微生物宏基因组去宿主化提取方法，包括第一次痰液液化、第二次痰液液化、微生物破壁、DNA提取和核酸质量检测等步骤。本发明还公开了一种痰液微生物宏基因组建库方法，包括样品基因组DNA提取、基因组DNA处理、文库扩增、文库初纯化、两步法片段选择和上机检测等步骤。本发明采用胰蛋白酶和SDS联合的温柔型消化法，将宿主基因组释放于溶液中，获得保留完整细胞壁结构的微生物，实现去宿主化微生物核酸提取。本发明所提供的提取方法及建库方法兼容性好，可广泛用于主流测序平台，具有灵活简便、高效快捷、节约成本的优点，具有较好的推广应用前景。

主权项

1.一种用于痰液微生物宏基因组去宿主化提取的工作液，其特征在于，包括第一次痰液液化工作液和第二次痰液液化工作液；所述第一次痰液液化工作液由胰蛋白酶和TB1 buffer组成；所述TB1 buffer包含如下终浓度的各组分：45～55mM CaCl2、132～142mM NaCl、2.2～3.2mM KCl、9.5～10.5mMNa2HPO4•12H2O和1.5～2.5mM KH2PO4，pH值为7～9；所述第二次痰液液化工作液由TB2 buffer组成，包含如下终浓度的各组分：5～15mMTris-HCl、10～20mM EDTA、0.5～1.5% Triton X-100、0.2～0.3%(w/v) SDS、45～55mM DTT和15～25mM HEPS-KOH，pH值为8.0。