[发明专利]一种T淋巴细胞白血病的CAR-T治疗载体及其构建方法和应用

摘要

本发明公开了一种T淋巴细胞白血病的CAR‑T治疗载体，包括慢病毒骨架质粒、人EF1α启动子、CAR嵌合受体结构域；CAR嵌合受体结构域包括：CD8 leader嵌合受体信号肽、CD7单链抗体轻链VL、CD7单链抗体重链VH、抗体内铰链UC Linker、CD8 Hinge嵌合受体铰链、CD8 Transmembrane嵌合受体跨膜区、TCR嵌合受体T细胞激活域以及嵌合受体共刺激因子区域。此外，本发明还公开了该载体的构建方法及其在制备治疗T淋巴细胞白血病的药物中的应用。

主权项

1.一种T淋巴细胞白血病的CAR‑T治疗载体，其特征在于，包括慢病毒骨架质粒、人EF1α启动子、CAR嵌合受体结构域；所述慢病毒骨架质粒包括：用于目的菌株大量扩增的含氨苄青霉素抗性基因AmpR序列，如SEQ ID NO.1所示；用于质粒复制的原核复制子pUC Ori序列，如SEQ ID NO.2所示；用于增强真核细胞内的复制的病毒复制子SV40 Ori序列，如SEQ ID NO.3所示；用于慢病毒包装的慢病毒包装顺式元件；ZsGreen1绿色荧光蛋白，如SEQ ID NO.11所示；IRES核糖体结合序列，如SEQ ID NO.12所示；用于增强转基因的表达效率的eWPRE增强型土拨鼠乙肝病毒转录后调控元件，如SEQ ID NO.13所示；所述人EF1α启动子的序列如SEQ ID NO.14所示；所述CAR嵌合受体结构域包括：如SEQ ID NO.15所示的CD8 leader嵌合受体信号肽、如SEQ ID NO.16所示的CD7单链抗体轻链VL、如SEQ ID NO.17所示的CD7单链抗体重链VH、如SEQ ID NO.18所示的抗体内铰链UC Linker、如SEQ ID NO.19所示的CD8 Hinge嵌合受体铰链、如SEQ ID NO.20所示的CD8 Transmembrane嵌合受体跨膜区、如SEQ ID NO.24所示的TCR嵌合受体T细胞激活域以及嵌合受体共刺激因子区域；所述嵌合受体共刺激因子区域选自CD137、ICOS、CD27、CD134、 CD28、MYD88、IL1R1、CD70、TNFRSF19L、TNFRSF27、TNFRSF1OD、TNFRSF13B、TNFRSF18肿瘤坏死因子超家族中的任意一种或多种的组合。