[发明专利]一种猪肺磷脂原料药中磷脂组分含量检测的新方法

摘要

本发明公布了一种猪肺磷脂原料药中磷脂组分含量检测的新方法。目的在于利用较简单的流动相提高了检测的分离度、结果的准确性、方法的重现性，减少了对色谱柱的损耗。开发出如下检测新方法：猪肺磷脂样品溶液经过正相硅胶色谱柱分离后，8种主要的磷脂组分得到基线分离，即使最难分离的磷脂酰甘油和磷脂酰乙醇胺也得到了很好的分离度，方法重现性高，然后经蒸发光散射检测器检测，用对数外标曲线法准确定量各磷脂组分含量。本发明分离度好，准确度高，重现性好，操作简单。

主权项

1.一种测定猪肺磷脂原料药中磷脂组分含量的检测方法，本发明的测定方法如下步骤所示：(1)供试品溶液的制备取磷脂原料药约20mg，精密称定，置50ml量瓶中，用三氯甲烷‑甲醇(2∶1)溶解并稀释至刻度，摇匀，6000rpm离心5分钟，取上清液作为供试品溶液1(用于磷脂酰胆碱的检测)；另取本品约50mg，精密称定，置10ml量瓶中，用三氯甲烷‑甲醇(2∶1)溶解并稀释至刻度，摇匀，6000rpm离心5分钟，取上清液作为供试品溶液2；(2)对照品溶液的制备取磷脂酰胆碱(PC)对照品约60mg，精密称定，用三氯甲烷‑甲醇(2∶1)溶解定容至10ml，摇匀，作为对照品母液1；取磷脂酰甘油(PG)对照品约10mg，精密称定，用三氯甲烷‑甲醇(2∶1)溶解定容至10ml，摇匀，作为对照品母液2；取磷脂酰乙醇胺(PE)对照品约20mg，精密称定，用三氯甲烷‑甲醇(2∶1)溶解定容至10ml，摇匀，作为对照品母液3；取磷脂酰肌醇(PI)对照品约20mg，精密称定，用三氯甲烷‑甲醇(2∶1)溶解定容至10ml，摇匀，作为对照品母液4；取磷脂酰丝氨酸(PSE)对照品约20mg，精密称定，用三氯甲烷‑甲醇(2∶1)溶解定容至10ml，摇匀，作为对照品母液5；取心磷脂(CAR)对照品约10mg，精密称定，用三氯甲烷‑甲醇(2∶1)溶解定容至10ml，摇匀，作为对照品母液6；取鞘磷脂(SM)对照品约40mg，精密称定，用三氯甲烷‑甲醇(2∶1)溶解定容至10ml，摇匀，作为对照品母液7；取溶血磷脂酰胆碱(LPC)对照品约10mg，精密称定，用三氯甲烷‑甲醇(2∶1)溶解定容至10ml，摇匀，作为对照品母液8；分别取对照品母液1：0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml；对照品母液2：0.1、0.2、0.4、0.6、0.8ml；对照品母液3：0.1、0.2、0.4、0.6、1.0ml；对照品母液4：0.1、0.25、0.4、0.5、0.6ml；对照品母液5：0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml；对照品母液6：0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml；对照品母液7：0.25、0.4、0.5、0.6、0.75ml；对照品母液8：0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml五个浓度梯度于5个10ml容量瓶中，用三氯甲烷‑甲醇(2∶1)稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含PC：180μg、240μg、300μg、360μg、420μg；PG：10μg、20μg、40μg、60μg、80μg；PE：20μg、40μg、80μg、120μg、200μg；PI：20μg、50μg、80μg、100μg、120μg；SPE：20μg、40μg、60μg、80μg、100μg；CAR：10μg、20μg、30μg、40μg、50μg；SM：100μg、160μg、200μg、240μg、300μg；LPC：10μg、20μg、30μg、40μg、50μg五个浓度梯度的溶液，作为混合对照品溶液；(3)色谱条件仪器：高效液相色谱仪，检测器为蒸发光散射检测器(ELSD)；色谱柱：硅胶色谱柱，；流动相：流动相A 甲醇‑水‑冰醋酸‑三乙胺，流动相B 正己烷‑异丙醇‑冰醋酸‑三乙胺；梯度洗脱(postrun：30min)：进样量：20μL；流速：1.0mL/min；柱温：40℃；ELSD检测条件：温度70℃，氮气流速2.0L/min，撞击器关闭，增益1；(4)样品检测取混合对照品溶液各20μl按浓度由低至高注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以浓度的对数值为横坐标，峰面积的对数值为纵坐标计算回归方程；取供试品溶液1和供试品溶液2各20μL注入液相色谱仪，分别记录样品各磷脂组分的峰面积；以供试品溶液1带入标准曲线计算PC含量；以供试品溶液2带入标准曲线计算PG、PE、PI、PSE、CAR、SM、LPC含量。