[发明专利]一种猪肺磷脂原料药中磷脂组分含量检测的新方法

说明书

本发明公布了一种猪肺磷脂原料药中磷脂组分含量检测的新方法。目的在于利用较简单的流动相提高了检测的分离度、结果的准确性、方法的重现性，减少了对色谱柱的损耗。开发出如下检测新方法：猪肺磷脂样品溶液经过正相硅胶色谱柱分离后，8种主要的磷脂组分得到基线分离，即使最难分离的磷脂酰甘油和磷脂酰乙醇胺也得到了很好的分离度，方法重现性高，然后经蒸发光散射检测器检测，用对数外标曲线法准确定量各磷脂组分含量。本发明分离度好，准确度高，重现性好，操作简单。

一、技术领域：

本发明涉及一种猪肺磷脂原料药中磷脂组分含量检测的方法，属于医药分析技术领域。

二、背景技术：

猪肺磷脂是一种天然提取的肺表面活性物质，主要作用是降低肺泡气-液界面表面张力，保持肺泡稳定，防止肺不张。在伴有呼吸障碍的早产儿，猪肺磷脂有使肺泡扩张和稳定的作用，可改善肺的顺应性和气体交换，从而治疗新生儿呼吸窘迫症。猪肺磷脂中各磷脂占干重的90％以上，大部分为磷脂酰胆碱(PC)，具有表面活性的PC为二棕榈酸磷脂酰胆碱；其余的磷脂还包括磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PSE)、心磷酯(CAR)和鞘磷脂(SM)，起到辅助的治疗作用；溶血磷脂酰胆碱(LPC)是磷脂酰胆碱的降解产物，浓度过高会溶解红细胞膜，因此也要加以检控。因此测定猪肺磷脂中各磷脂组分的含量是非常有必要的。现有的磷脂含量的测定主要是磷含量法和硫氰亚铁铵比色法，前者测定磷含量，通过折算磷脂的平均分子量估算磷脂含量，后者通过紫外比色法测定，这两种方法准确度差，操作繁琐，易受干扰，而且只能得到磷脂总含量值。《中国药典》卵磷脂和大豆磷脂项下采用了高效液相色谱法，但是不能基线分离磷脂酰甘油和磷脂酰乙醇胺，分离度只有0.8，而且两相流动相中均含有水，对正相色谱柱损耗很大。国外也有采用高效液相色谱法测定的案例，但采用三相流动相体系，复杂繁琐，重现性低。本方法采用高效液相色谱法，样品溶液通过正相硅胶柱分离，再采用蒸发光散射检测器进行检测，对数标准曲线法计算含量，有效地测定了各磷脂组分含量，本法可使磷脂酰甘油和磷脂酰乙醇胺的分离度达到2.4，其他磷脂组分的分离度更好。

三、发明内容

本发明的目的在于提供一种检测限低，干扰小，操作简单，灵敏度好，准确度高，重现性好，特别是针对猪肺磷脂中磷脂组分含量的检测方法。可使最难分离的磷脂酰甘油和磷脂酰乙醇胺的分离度达到2.4，有效保证了定量的准确性和重现性；采用两相流动相体系，操作简单，减小对色谱柱的损耗。

本发明的测定方法如下步骤所示：

(1)供试品溶液的制备

取磷脂原料药约20mg，精密称定，置50ml量瓶中，用三氯甲烷-甲醇(2∶1)溶解并稀释至刻度，摇匀，6000rpm离心5分钟，取上清液作为供试品溶液1(用于磷脂酰胆碱的检测)；另取本品约50mg，精密称定，置10ml量瓶中，用三氯甲烷-甲醇(2∶1)溶解并稀释至刻度，摇匀， 6000rpm离心5分钟，取上清液作为供试品溶液2。

(2)对照品溶液的制备