[发明专利]一种苦荞籽粒RNA的快速提取方法

摘要

本发明提供了一种苦荞籽粒RNA的快速提取方法，包括以下步骤(1)灭菌处理；(2)CTAB提取液裂解；所述CTAB提取液配方为2％CTAB(W/V)，60mM Tris‑HCl，25mM EDTA，15％无水乙醇，pH为8.0；(3)常温12000rpm离心5～10min；(4)向上清液中加入氯仿‑异戊醇混合液，混匀后加入pH为4.6的醋酸钾，常温12000rpm离心5～10min，取上清液；(5)向上清液加入LiCl溶液，‑20℃下静置沉淀1～2h，取出于4℃下12000rpm离心10min，将管底沉淀物用乙醇漂洗，加入重蒸水溶解，做电泳检测。本发明方法能够获得较高纯度的RNA，且RNA损失少，提取浓度高，提取速度快，经电泳检测条带清晰，RNA完整性好，OD260/OD280的比值在1.8～2.0之间，可用于基因表达分析或分子克隆等分子生物学研究。

主权项

一种苦荞籽粒RNA的快速提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)灭菌处理：对所用器皿和器具进行乙醇灼烧灭菌，并在操作前预冷；(2)在离心管中加入65℃预热后的CTAB提取液，然后加入β‑巯基乙醇混匀，再加入研磨成粉末状的苦荞籽粒样品进行剧烈混匀；所述CTAB提取液配方为：2％CTAB(W/V)，60mMTris‑HCl，25mMEDTA，15％无水乙醇，pH为8.0；(3)将离心管置于65℃水浴处理15～20min，水浴完毕后取出，于常温下12000rpm离心5～10min；(4)吸取步骤(3)离心后所得上清液于新管，加入等体积的配比为24:1的氯仿‑异戊醇混合液，混匀1min，然后加入pH为4.6的醋酸钾使其终浓度为1.2M，充分混匀后冰浴15min，常温下12000rpm离心5～10min，吸取上清液于新管；(5)向步骤(4)离心后所得上清液中加入等体积的LiCl溶液使其管内终浓度为2M，‑20℃下静置沉淀1～2h，取出于4℃下12000rpm离心10min，倾弃液体，将管底沉淀物用乙醇漂洗，短离心后晾干乙醇，向沉淀物中加入重蒸水溶解，做电泳检测。