[发明专利]一种苦荞籽粒RNA的快速提取方法在审
| 申请号： | 201711372936.7 | 申请日： | 2017-12-19 |
| 公开（公告）号： | CN107841499A | 公开（公告）日： | 2018-03-27 |
| 发明（设计）人： | 王迅;张贤聪;黎媛;汪志辉;唐懿;王进 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 成都帝鹏知识产权代理事务所(普通合伙)51265 | 代理人： | 黎照西 |
| 地址： | 611130 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 籽粒 rna 快速 提取 方法 | ||
1.一种苦荞籽粒RNA的快速提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)灭菌处理：对所用器皿和器具进行乙醇灼烧灭菌，并在操作前预冷；
(2)在离心管中加入65℃预热后的CTAB提取液，然后加入β-巯基乙醇混匀，再加入研磨成粉末状的苦荞籽粒样品进行剧烈混匀；所述CTAB提取液配方为：2％CTAB(W/V)，60mMTris-HCl，25mMEDTA，15％无水乙醇，pH为8.0；
(3)将离心管置于65℃水浴处理15～20min，水浴完毕后取出，于常温下12000rpm离心5～10min；
(4)吸取步骤(3)离心后所得上清液于新管，加入等体积的配比为24:1的氯仿-异戊醇混合液，混匀1min，然后加入pH为4.6的醋酸钾使其终浓度为1.2M，充分混匀后冰浴15min，常温下12000rpm离心5～10min，吸取上清液于新管；
(5)向步骤(4)离心后所得上清液中加入等体积的LiCl溶液使其管内终浓度为2M，-20℃下静置沉淀1～2h，取出于4℃下12000rpm离心10min，倾弃液体，将管底沉淀物用乙醇漂洗，短离心后晾干乙醇，向沉淀物中加入重蒸水溶解，做电泳检测。
2.根据权利要求1所述的苦荞籽粒RNA的快速提取方法，其特征在于，步骤(1)中所述CTAB提取液与β-巯基乙醇的体积比为80:1。
3.根据权利要求2所述的苦荞籽粒RNA的快速提取方法，其特征在于，所述CTAB提取液的加入量为800ul，所述β-巯基乙醇的加入量为10ul。
4.根据权利要求3所述的苦荞籽粒RNA的快速提取方法，其特征在于，步骤(1)中取新鲜或冻存的8-15粒苦荞籽粒样品在液氮中研磨成粉末，然后用小勺刮入离心管中。
5.根据权利要求1所述的苦荞籽粒RNA的快速提取方法，其特征在于，步骤(3)中在水浴过程中震荡混匀数次。
6.根据权利要求1所述的苦荞籽粒RNA的快速提取方法，其特征在于，步骤(5)中将管底沉淀物先用75％乙醇漂洗一次，再用无水乙醇漂洗一次。
7.根据权利要求1所述的苦荞籽粒RNA的快速提取方法，其特征在于，步骤(5)中所述晾干乙醇为将倒置于吸水纸上晾干至管壁无液滴。
8.根据权利要求1所述的苦荞籽粒RNA的快速提取方法，其特征在于，步骤(5)中向沉淀物中加入重蒸水15～20ul进行溶解。
9.根据权利要求1所述的苦荞籽粒RNA的快速提取方法，其特征在于，灭菌处理中，对所用的研钵、研棒、小勺器具用1-2ml无水乙醇灼烧灭菌。
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