[发明专利]从脂肪中获取大量脂肪间充质干细胞的方法

摘要

本发明涉及从脂肪中获取大量脂肪间充质干细胞的方法。一方面，本发明涉及分离和培养脂肪间充质干细胞的方法，步骤为：将通过抽脂获取掺杂有膨胀液的脂肪样本于离心管中，离心；移除最上层油脂，并分别移取悬浮的脂肪颗粒和底层细胞沉淀，备用；向所得脂肪颗粒中加入消化酶混合液，振荡消化，终止消化，重悬细胞沉淀；底层细胞沉淀加红细胞裂解液静置裂解，离心，重悬细胞沉淀；合并细胞悬液，分离出作为原代的脂肪间充质干细胞；进一步将其进行培养繁殖。还涉及由此方法制得的脂肪间充质干细胞制剂，用于分离脂肪间充质干细胞的消化酶混合液，以及用于培养脂肪间充质干细胞的培养基。本发明各方面呈现如说明书所述的优异技术效果。

主权项

1.分离和培养脂肪间充质干细胞的方法，其包括如下步骤：(1)将通过抽脂获取掺杂有膨胀液的脂肪样本于离心管中，500～1000rpm离心2～5min；(2)移除最上层油脂，并分别移取悬浮的脂肪颗粒和底层细胞沉淀，备用；(31)向步骤(2)所得脂肪颗粒中以体积比1：0.8～1.2加入消化酶混合液，在37℃以100rpm振荡消化20～40min；消化结束后，加入等体积的完全培养基终止消化，1000～2000rpm离心3～8min，弃上清，PBS重悬细胞沉淀；(32)将步骤(2)所得底层细胞沉淀用PBS重悬，加入等量红细胞裂解液静置5～15min进行裂解；红细胞充分裂解后，1000～2000rpm离心3～8min，弃上清，PBS重悬细胞沉淀；(4)合并步骤(31)和(32)所得细胞悬液，100μm滤网过滤，分离出作为原代的脂肪间充质干细胞；(5)将分离出的原代脂肪间充质干细胞按照30000细胞/cm^2接种至培养瓶进行培养，加入完全培养基，37℃5％CO2培养；(6)培养2天后换液，去除非贴壁细胞，待生长到一周时，收获P1代脂肪间充质干细胞；(7)取少量细胞照步骤(5)和步骤(6)继续传代至下一代直至P5代，收获并观察各代次脂肪间充质干细胞，并进行相关检测。