[发明专利]从脂肪中获取大量脂肪间充质干细胞的方法

说明书

本发明涉及从脂肪中获取大量脂肪间充质干细胞的方法。一方面，本发明涉及分离和培养脂肪间充质干细胞的方法，步骤为：将通过抽脂获取掺杂有膨胀液的脂肪样本于离心管中，离心；移除最上层油脂，并分别移取悬浮的脂肪颗粒和底层细胞沉淀，备用；向所得脂肪颗粒中加入消化酶混合液，振荡消化，终止消化，重悬细胞沉淀；底层细胞沉淀加红细胞裂解液静置裂解，离心，重悬细胞沉淀；合并细胞悬液，分离出作为原代的脂肪间充质干细胞；进一步将其进行培养繁殖。还涉及由此方法制得的脂肪间充质干细胞制剂，用于分离脂肪间充质干细胞的消化酶混合液，以及用于培养脂肪间充质干细胞的培养基。本发明各方面呈现如说明书所述的优异技术效果。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种脂肪间充质干细胞的获取方法，特别是涉及一种自体脂肪间充质干细胞的培养方法。本发明还涉及上述自体脂肪间充质干细胞培养中所用的培养基。使用本发明培养基培养所述自体脂肪间充质干细胞时，能够呈现本发明所述优异技术效果。得到的这些自体脂肪间充质干细胞可以用于自体应用。

背景技术

间充质干细胞(MCS)是成人干细胞具有多向分化潜能的热点细胞，是一种大多数成人器官中发现的具有骨形成能力和造血功能的细胞群体，可以从骨髓、脐血、脂肪中提取，在特定的培养条件下，间充质干细胞可以分化为脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞和肌细胞等。

间充质干细胞是目前组织工程的主要种子细胞。经历了多年多学者的研究后，虽然组织工程已经获得了很大进展，然而，但由于目前缺乏理想筛选方法，间充质干细胞不易获取、体外扩增困难等限制，使其在临床级别回输的应用受到限制。因此，寻找一种易于获得、免疫原性低、易于体外扩增的临床治疗级别的种子细胞是目前组织工程迫切需要解决的问题之一。

人们已经从脂肪组织分离出一类具有多向分化潜能的干细胞，并在体外培养特殊体系中成功地分化为脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞与肌细胞等，这种可分化的干细胞被认可为脂肪来源的间充质细胞，即脂肪干细胞或脂肪间充质干细胞(adipose-derived stemcells，ADSCs)是近年来从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞，脂肪干细胞具有分化多胚层全能性特征，其中包括中胚层，内胚层和外胚层分化细胞的能力，能分泌许多潜在的有利的生长因子和细胞活素以细胞为基础的促进创面愈合的治疗方法快速发展。脂肪源性干细胞是一群多功能间充质干细胞，可以分化为其他的细胞系在脂肪组织的非脂肪(间质)碎片中存在大量的脂肪源性细胞，且易于分离获取。

作为各种组织缺损的辅助治疗方法，脂肪源性干细胞被推荐应用。在创面愈合过程中，血管再生是一个重要的步骤新生血管的形成是支持肉芽组织形成和角化细胞存活扩增愈合创伤的的必要条件。因此认为，脂肪源性干细胞是通过快速促血管再生从而促进创面的愈合。另外，脂肪源性干细胞还显示出通过细胞分化以及分泌促进胶原合成和真皮成纤维细胞迁移的长因子来促进创面的愈合

人们已将脂肪源性干细胞与细胞外基质支架成分联合应用于动物的皮肤软组织创面，发现脂肪源性干细胞以促进支架的血管化能力。有研究结果显示，脂肪源性细胞对创面愈合的促进作用与脂肪源性干细胞促进上皮化和肉芽组织的形成有关，并且脂肪源性干细胞有潜在的表皮细胞分化能力研究结果还提示脂肪源性干细胞的远位分化能力是多功能脂肪干细胞对创面的微环境的一个反应。脂肪源性干细胞对局部血管的重塑包括直接分化为血管内皮细胞和分泌血管生长因子，后两者则有益于血管的再生。即是说，脂肪源性干细胞通过细胞分化和血管再生促进创面的愈合。另外，人们将脂肪源性干细胞与血小板源性生长因子，即一种众所周知的参与正常创面愈合过程的因子，联合用于创面的治疗。研究结果显示二者的联合应用有协同作用，即可能通过提高生长因子的水平而促进了创面的愈合。

理论上讲，细胞疗法前景广阔，因为多功能干细胞或祖细胞通过对创面缺失组织的再生和持续提供许多有利因子而促进创面的愈合。尽管如此，关于脂肪源性干细胞对创面愈合的机制的研究仍有待于进一步探索。脂肪源性干细胞对局部血管的重塑包括直接分化为血管内皮细胞和分泌生血管生长因子，后两者则有益于血管的再生。