[发明专利]一种测定茶叶1，2，6三没食子酰-β-D-葡萄糖的方法及其用途

摘要

一种测定茶叶1，2，6三没食子酰‑β‑D‑葡萄糖的方法及其用途，属于茶叶检测方法技术领域。采用以下方法制备：1）茶样制备；2）样品提取；3）样品测定：采用超高压液相色谱‑飞行时间质谱仪进行1，2，6三没食子酰‑β‑D‑葡萄糖含量测定。上述一种测定茶叶1，2，6三没食子酰‑β‑D‑葡萄糖在茶树品种选育中及用途，具有准确、高效的特点，可大大提高相关品种选育进度，同时也是研究茶叶1，2，6三没食子酰‑β‑D‑葡萄糖合成机理的理想方法。

主权项

1.一种测定茶叶1，2，6三没食子酰‑β‑D‑葡萄糖的方法，其特征在于采用以下方法制备：1）茶样制备：在春茶季节采摘待测茶叶样品，制成干茶后用磨样机磨成茶粉；2）样品提取：准确称取茶样0.15‑0.25 g，加4‑6mL的65‑70%甲醇溶液，65‑75℃水浴浸提9‑11 min，每隔5 min摇动一次，冷却至室温，转入离心机在3200‑3600r/min转速下离心9‑11 min，取出上清液后再加4‑6ml65‑70%甲醇溶液提取一次，合并提取液定容至10 mL，摇匀，吸取2 mL提取液至10 mL刻度管内，加8 mL稳定液定容，过0.45μm有机微孔滤膜，取滤液用于后续测定；3）样品测定：采用超高压液相色谱‑飞行时间质谱仪进行1，2，6三没食子酰‑β‑D‑葡萄糖含量测定；流动相：0.1%甲酸水溶液（A）‑含0.1%甲酸的乙腈（B），线性梯度洗脱：0/5分钟/B%、15/95分钟/B%、 18/95分钟/B%；柱温28‑32℃，流速0.8‑1.2 mL·min‑1，检测波长254 nm；进样量10μL；质谱条件：大气压电喷雾离子源（ESI）,负离子模式检测，电压为‑4.5 kV，温度530‑560◦C；阳离子模式检测电压为+5.5 kV，温度580‑620◦C；雾化气压力45‑55psi，碎片电压30‑70 V，质谱m/z扫描范围为100–2000；1，2，6三没食子酰‑β‑D‑葡萄糖出峰时间在29‑30分钟，分子量大小为636.1，[M+NH4]+/[M−H]−为654/635, 二级质谱特征碎片为负离子模式（169，313，465，483，635）和阳离子模式（153，467）；1，2，6三没食子酰‑β‑D‑葡萄糖相对含量由儿茶素标样EGCG进行换算。