[发明专利]一种测定茶叶1，2，6三没食子酰-β-D-葡萄糖的方法及其用途

说明书

一种测定茶叶1，2，6三没食子酰‑β‑D‑葡萄糖的方法及其用途，属于茶叶检测方法技术领域。采用以下方法制备：1）茶样制备；2）样品提取；3）样品测定：采用超高压液相色谱‑飞行时间质谱仪进行1，2，6三没食子酰‑β‑D‑葡萄糖含量测定。上述一种测定茶叶1，2，6三没食子酰‑β‑D‑葡萄糖在茶树品种选育中及用途，具有准确、高效的特点，可大大提高相关品种选育进度，同时也是研究茶叶1，2，6三没食子酰‑β‑D‑葡萄糖合成机理的理想方法。

技术领域

本发明属于茶叶检测方法技术领域，具体为一种测定茶叶1，2，6三没食子酰-β-D-葡萄糖的方法及其用途。

背景技术

1，2，6三没食子酰-β-D-葡萄糖是一类重要的多酚类化合物。现有研究表明该物质具有抗肝癌、抑制肿瘤、抑制HIV与靶细胞融合及抗多重耐药菌等作用。但目前市场上没有该物质的标准品，大多数植物1，2，6三没食子酰-β-D-葡萄糖含量也很低，如何发现和利用该物质是目前农业、医药行业的一大难题。茶叶富含多酚类物质，但一般品种1，2，6三没食子酰-β-D-葡萄糖含量很低，变异范围在0-6.6 mg/g之间。因此，如何检测茶叶中的1，2，6三没食子酰-β-D-葡萄糖含量，同时培育富含1，2，6三没食子酰-β-D-葡萄糖的茶树品种是目前亟待解决的一大难题。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于设计提供一种测定茶叶1，2，6三没食子酰-β-D-葡萄糖的方法及其用途的技术方案，具有准确、高效的特点，可大大提高相关品种选育进度，同时也是研究茶叶1，2，6三没食子酰-β-D-葡萄糖合成机理的理想方法。

所述的一种测定茶叶1，2，6三没食子酰-β-D-葡萄糖的方法，其特征在于采用以下方法制备：

1）茶样制备：在春茶季节采摘待测茶叶样品，制成干茶后用磨样机磨成茶粉；

2）样品提取：准确称取茶样0.15-0.25 g，加4-6mL的65-70%甲醇溶液，65-75℃水浴浸提9-11 min，每隔5 min摇动一次，冷却至室温，转入离心机在3200-3600r/min转速下离心9-11 min，取出上清液后再加4-6ml65-70%甲醇溶液提取一次，合并提取液定容至10mL，摇匀，吸取2 mL提取液至10 mL刻度管内，加8 mL稳定液定容，过0.45μm有机微孔滤膜，取滤液用于后续测定；

3）样品测定：采用超高压液相色谱-飞行时间质谱仪进行1，2，6三没食子酰-β-D-葡萄糖含量测定；

流动相：0.1%甲酸水溶液（A）-含0.1%甲酸的乙腈（B），线性梯度洗脱：0/5分钟/B%、15/95分钟/B%、 18/95分钟/B%；柱温28-32℃，流速0.8-1.2 mL·min^-1，检测波长254 nm；进样量10μL；

质谱条件：大气压电喷雾离子源（ESI）,负离子模式检测，电压为-4.5 kV，温度530-560^◦C；阳离子模式检测电压为+5.5 kV，温度580-620^◦C；雾化气压力45-55psi，碎片电压30-70 V，质谱m/z扫描范围为100–2000；

1，2，6三没食子酰-β-D-葡萄糖出峰时间在29-30分钟，分子量大小为636.1，[M+NH₄]⁺/[M−H]⁻为654/635, 二级质谱特征碎片为负离子模式（169，313，465，483，635）和阳离子模式（153，467）；1，2，6三没食子酰-β-D-葡萄糖相对含量由儿茶素标样EGCG进行换算。

所述的一种测定茶叶1，2，6三没食子酰-β-D-葡萄糖的方法，其特征在于步骤2）中：甲醇溶液浓度为70%甲醇溶液，水浴温度为70℃，浸提时间为10 min，离心机转速为3500r/min，离心时间为10 min。