[发明专利]一种测定茶叶1，2，6三没食子酰-β-D-葡萄糖的方法及其用途

权利要求书

1.一种测定茶叶1，2，6三没食子酰-β-D-葡萄糖的方法，其特征在于采用以下方法测定：

1）茶样制备：在春茶季节采摘待测茶叶样品，制成干茶后用磨样机磨成茶粉；

2）样品提取：准确称取茶样0.15-0.25 g，加4-6mL的70%甲醇溶液，70℃水浴浸提10min，每隔5 min摇动一次，冷却至室温，转入离心机在3500r/min转速下离心10min，取出上清液后再加4-6ml65-70%甲醇溶液提取一次，合并提取液定容至10 mL，摇匀，吸取2 mL提取液至10 mL刻度管内，加8 mL稳定液定容，过0.45μm有机微孔滤膜，取滤液用于后续测定；

3）样品测定：采用超高压液相色谱-飞行时间质谱仪进行1，2，6三没食子酰-β-D-葡萄糖含量测定；

使用美国Waters公司的UPLC C18色谱柱，C18色谱柱规格为1.7μm，2.1×50mm；

流动相：流动相A为0.1%甲酸水溶液，流动相B为含0.1%甲酸的乙腈，线性梯度洗脱：0/5分钟/B%、15/95分钟/B%、 18/95分钟/B%；柱温30℃，流速1.0 mL·min^-1，检测波长254 nm；进样量10μL；

质谱条件：大气压电喷雾离子源，负离子模式检测，电压为-4.5 kV，温度550^◦C；阳离子模式检测电压为+5.5 kV，温度600^◦C；雾化气压力50psi，碎片电压40-50 V，质谱m/z扫描范围为500–1000；

1，2，6三没食子酰-β-D-葡萄糖出峰时间在29-30分钟，分子量大小为636.1，[M+NH₄]⁺/[M−H]⁻为654/635，二级质谱特征碎片分为负离子模式和阳离子模式，负离子模式的二级质谱特征碎片为169，313，465，483，635，阳离子模式的二级质谱特征碎片为153，467；1，2，6三没食子酰-β-D-葡萄糖相对含量由儿茶素标样EGCG进行换算。

2.如权利要求1所述的一种测定茶叶1，2，6三没食子酰-β-D-葡萄糖的方法，其特征在于步骤3）中：1，2，6三没食子酰-β-D-葡萄糖出峰时间在29.6分钟。