[发明专利]一种提高cyp3A5表达酶代谢活性的方法在审
| 申请号： | 201711236210.0 | 申请日： | 2017-11-30 |
| 公开（公告）号： | CN108251437A | 公开（公告）日： | 2018-07-06 |
| 发明（设计）人： | 戴仁科;王珍玉;戴天明;江伟凡;郭佳音;邓继峰;张伟;郭子钲 | 申请（专利权）人： | 中山珐玛斯医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/53 | 分类号： | C12N15/53;C12N15/81;C12N1/19;C12N9/02;C12R1/84 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 夏艳 |
| 地址： | 528437 广东省中山*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于酵母的CYP3A5生物反应器及其构建方法，其是通过将人源CYP3A5基因根据酵母密码子的编码偏好进行序列优化，而后利用基因工程技术将序列优化后的人cyp3A5及其氧化还原酶NADPH共转染到酵母工程菌株的基因组中，实现人cyp3A5及NADPH在毕赤酵母中的大量表达，药物通过通透性增加的酵母细胞壁进入胞浆，能够在酵母发酵培育过程中实现对特定药物进行选择性的代谢过程，构建基于基因工程酵母的药物代谢生物反应器，以生物合成的方法高效生产专一的药物代谢物；为药理学、毒理学研究提供了可靠的体外模型，为我国新药开发提供了一个新的研究平台。 | ||
| 搜索关键词： | 生物反应器 序列优化 构建 基因工程技术 基因工程酵母 酵母工程菌株 药理学 毒理学研究 酵母密码子 酵母细胞壁 氧化还原酶 药物代谢物 毕赤酵母 编码偏好 代谢过程 代谢活性 高效生产 酵母发酵 生物合成 体外模型 新药开发 药物代谢 共转染 基因组 通透性 胞浆 人源 酵母 培育 研究 | ||
【主权项】：
1.一种提高重组人源cyp3A5酵母His+Mut+生物反应器的cyp3A5表达酶代谢活性的方法，其特征在于，所述方法是在活体重组人源cyp3A5酵母His+Mut+生物反应器中进行的，包括以下步骤：(1)、将冻存的重组人源cyp3A5酵母His+Mut+生物反应器进行活化，经传代扩培后，酵母大量增殖；(2)、甲醇诱导培养60～72h后，往BMMY培养基中加入3～6％的乙醚，同时加入100ul1mmol/L的睾酮24h‑48h后，离心，分别收集上清和细胞；(3)、用乙腈重悬细胞，超声破碎后，离心收集上清，即可进行检测。
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