[发明专利]同步检测赭曲霉素、呕吐毒素和T‑2毒素的试纸卡、制备及检测方法

摘要

本发明涉及同步检测赭曲霉素、呕吐毒素和T‑2毒素的试纸卡、制备及检测方法，属于免疫学检测领域，试纸卡包括卡壳和试纸条，试纸条包括底板及依次搭接粘贴在底板上的吸水垫、检测垫、结合垫和样品垫；检测垫为设有质控线、检测线T1、检测线T2和检测线T3的NC膜，质控线包被羊抗鼠二抗，检测线T1包被OTA‑BSA，检测线T2包被DON‑BSA，检测线T3包被T‑2‑BSA；结合垫为包埋时间分辨荧光微球标记的赭曲霉素、呕吐毒素和T‑2毒素单克隆抗体的玻璃纤维素膜；样品垫是经样品垫处理液浸泡后干燥的玻璃纤维素膜。本发明为系统化、便捷化、规范化地定量同步检测至少两种真菌毒素提供一种新方法，稳定性好、敏感度高。

主权项

同步检测赭曲霉素、呕吐毒素和T‑2毒素的试纸卡的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、检测垫的制备：制备浓度为0.5mg/mL的羊抗鼠单克隆抗体包被液，浓度为0.3 mg/mL的赭曲霉素半抗原‑牛血清白蛋白偶联物包被液，浓度为0.3 mg/mL的呕吐毒素半抗原‑牛血清白蛋白偶联物包被液，浓度为0.8 mg/mL的T‑2毒素半抗原‑牛血清白蛋白偶联物包被液；将四种包被液各自单独吸至划膜机管线中，均按照0.8μL/cm在硝酸纤维素膜上依次划出质控线C、检测线T1、检测线T2和检测线T3；其中，羊抗鼠单克隆抗体包被液划出质控线C，赭曲霉素半抗原‑牛血清白蛋白偶联物包被液划出检测线T1，呕吐毒素半抗原‑牛血清白蛋白偶联物包被液划出检测线T2，T‑2毒素半抗原‑牛血清白蛋白偶联物包被液划出检测线T3；将经划线的硝酸纤维素膜置于37℃鼓风干燥箱中干燥3‑4 h，制得检测垫；步骤二、结合垫的制备：将荧光微球分散液置于离心管中；加入MES缓冲液，在超声条件下混匀，离心弃上清收集微球沉淀，重复此步骤以清洗微球；将微球沉淀溶解于MES缓冲液中，混匀，加入EDC溶液，22‑25℃避光活化，离心弃上清，加MES缓冲液，超声打散微球，离心弃上清；加入硼酸缓冲液，超声打散，然后依次加入赭曲霉素单克隆抗体、呕吐毒素单克隆抗体和T‑2毒素单克隆抗体，避光反应；加入甘氨酸溶液，避光反应30min，再加入BSA溶液，避光反应30min，完成封闭；离心复溶，形成荧光微球‑抗体复合物溶液；将荧光微球‑抗体复合物溶液喷至玻璃纤维素膜上，干燥，制得结合垫；步骤三、样品垫的制备：将玻璃纤维素膜放入配置好的样品垫处理液中，浸泡0.5 h，放入37℃鼓风干燥箱中，干燥8‑10 h，制得样品垫；所述样品垫处理液为pH 7.4 的PBS缓冲液，其中含有的成分及其浓度分别为：质量分数为0.5% 的蔗糖，质量分数为0.5% 的PVP‑K30，质量分数为0.5% 的PEG‑20000，质量分数为0.1%的PEG‑6000，质量分数为0.3%的干酪素，体积分数为0.5%的Tween 20，质量分数为0.1%的S9，质量分数为0.1%的S17和质量分数为0.1%的S21；步骤四、试纸卡的组装：以PVC板为底板，将样品垫、结合垫、检测垫和吸水垫依次搭接粘贴在底板上，每个相邻处搭接时有1‑2mm重叠，并使检测垫上的检测线T1、检测线T2和检测线T3靠近样品垫一侧、质控线C靠近吸水垫一侧，用切条机将贴好的PVC板切成条状，形成试纸条；将试纸条与卡壳组合，形成试纸卡，密封保存。