[发明专利]一种烟草对南方根结线虫抗性的鉴定方法

摘要

本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种鉴定烟草对南方根结线虫是否存在抗性的鉴定方法的专利申请。该方法包括制备PVY‑NIB基因，并构建瞬时表达载体PVXpND108‑NIB；转化农杆菌菌株，制备转染用菌液；浸染烟草叶片，鉴定烟草对南方根结线虫的抗性等步骤。本发明利用烟草抗南方根结线虫基因与PVY‑MSNR基因紧密连锁的特征，通过利用特定的基因，进而转化烟草后，通过抗病与易感品种的表型差别准确和快速的鉴别判定待检品种的抗病性。与现有技术相比，本发明具有鉴定周期短、可批量应用、鉴定效率高、可为抗病新品培育和筛选奠定技术基础等积极有益效果。

主权项

一种烟草对南方根结线虫抗性的鉴定方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：（一）制备PVY‑NIB基因，并构建瞬时表达载体PVX:pND108‑NIB；具体而言：首先，制备PVY‑NIB基因，所述PVY‑NIB基因的碱基序列如SEQ ID NO.1所示；其次，对pND108空载体进行双SalI、Notl双酶切，并回收酶切产物；最后，将pND108空载体的双酶切产物与PVY‑NIB基因进行连接，转化并筛选鉴定后，构建获得瞬时表达载体PVX:pND108‑NIB；（二）转化农杆菌菌株，制备转染用菌液，具体而言：将步骤（一）中所制备瞬时表达载体PVX:pND108‑NIB转化农杆菌菌株，所述农杆菌菌株采用农杆菌LBA4404菌株或农杆菌GV3101菌株；转化完成后，筛选阳性转化菌株并鉴定，对鉴定正确菌株进一步培养制备浸染用菌液；（三）浸染烟草叶片，鉴定烟草对南方根结线虫的抗性，具体而言：将待鉴定烟草品种种子播种后，选取生长6~8周的烟草叶片作为鉴定材料；吸取步骤（二）中所制备浸染用菌液，对鉴定材料进行浸润处理，继续培养并观察叶片的生长情况；若烟草叶片上表现出过敏性坏死反应，表明该烟草品种对南方根结线虫具有抗性；若烟草叶片上未表现出任何异常状况，表明该烟草品种对南方根结线虫是易感的，不具有抗性。