[发明专利]一种人参自毒物质人参皂苷降解菌筛选的方法

摘要

本发明公开了一种人参自毒物质人参皂苷降解菌筛选的方法，属于微生物菌种筛选技术领域，该方法利用微生物在土壤中经过一定途径的代谢活动将自毒物质降解的原理，用带有一定含量人参自毒物质人参皂苷的培养基培养不同菌种，在菌种利用培养基中营养物质生长之后，将用反相高效液相色谱检测发酵液中自毒物质人参皂苷的含量变化进行对比，从而筛选出具有较高人参自毒物质降解能力的菌株。应用本方法筛选出的人参自毒物质降解菌用于人参种植，既解决了人参重茬病害问题，且不会对人参的正常生长有副作用，又不会污染环境、对环境造成危害，具有良好的经济和社会效益。

主权项

一种人参自毒物质人参皂苷降解菌筛选的方法，其特征在于：步骤一：人参皂苷降解菌的初步筛选（1）取50mL培养基加入2mg/mL83%的人参皂苷标准样品溶液1mL，制备多组样品液，向其中分别接入不同菌种；（2）将（1）中的多组处理样品分别于34℃条件下以220rpm的速度摇床培养24h，之后由高速冷冻离心机以12000rpm的速度离心20min；（3）分别取（2）中的上清液于60℃旋转蒸发器旋转蒸干；（4）将（3）中所得的各蒸干固体用甲醇溶解定容至10mL；（5）将（4）所得溶液分别由高速冷冻离心机以12000rpm的速度再次离心20min；（6）取（5）中所得的各上清液分别由0.45μm微孔滤膜过滤，超声5min排除气泡后，利用反相高效液相色谱法检测各组样品中人参皂苷的含量，以人参皂苷含量最低为判断标准筛选出具有最优人参皂苷降解效果的菌种；步骤二：人参皂苷降解菌对人参皂苷降解效果的进一步判定：（1）选用步骤一筛选出的人参皂苷含量最低的菌种为进一步的实验菌种；（2）取两瓶100mL的LB培养基，分别向其中加入2mg/mL83%的人参皂苷标准样品溶液1mL，其中一瓶设置为对照，另一瓶接入步骤一筛选出的人参皂苷降解菌菌种；（3）两瓶实验样品均于34℃条件下以220rpm的速度摇床培养48h；（4）每隔两天跟踪检测各实验样品中的人参皂苷含量，其中，每一次检测取10mL发酵液，在6℃条件下由高速冷冻离心机以10000rpm的速度离心20min；（5）分别取上清液于0.45μm微孔滤膜过滤，超声5min排除气泡后利用反相高效液相色谱法检测人参皂苷的含量，从而判定所筛选菌种对人参皂苷降解效果的有效性。