[发明专利]一种应用于模式动物斑马鱼转基因的快速筛选方法在审
| 申请号： | 201711157630.X | 申请日： | 2017-11-20 |
| 公开（公告）号： | CN107881200A | 公开（公告）日： | 2018-04-06 |
| 发明（设计）人： | 崔恒宓;薛松磊;孙振;欧阳娟;徐慧;沈晖 | 申请（专利权）人： | 扬州大学 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N15/89;C12N9/22;A01K67/027 |
| 代理公司： | 南京知识律师事务所32207 | 代理人： | 卢亚丽 |
| 地址： | 225009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明提供一种应用于模式动物斑马鱼转基因的快速筛选方法，包括以下步骤1)构建含有强启动子、目的基因和标签基因的基因表达载体；2)设计出针对靶基因的特异性靶点，获得靶向SgRNA序列；3)在特异性靶点的基础上构建同源重组载体；4)将同源重组载体片段、SgRNA序列体外转录合成的mRNA，以及体外转录合成的nCas9‑mRNA，三者共同注射斑马鱼受精卵；5)先筛选出靶基因功能缺失的斑马鱼；再通过标签基因进行第二次筛选，获得标签基因表达个体，从而获得表达目的基因表达个体。该方法可以对早期斑马幼鱼进行筛选，达到快速建立转基因模型目的。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 应用于 模式 动物 斑马 转基因 快速 筛选 方法 | ||
【主权项】：
一种应用于模式动物斑马鱼转基因的快速筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：1)构建含有强启动子、目的基因和标签基因的基因表达载体；2)设计出针对靶基因的特异性靶点，筛选获得靶向敲除最优的SgRNA；3)在2)中靶基因获得的特异性靶点的基础上，设计同源臂，并在1)中基因表达载体两翼加上同源臂，构建成同源重组载体；4)斑马鱼显微注射：将步骤3)中所获得的含有目的基因、标签基因和靶基因同源臂的同源重组载体片段和步骤2)中所获得SgRNA，以及体外转录获得的nCas9‑mRNA，共同注射斑马鱼受精卵；5)首先筛选出靶基因功能缺失的斑马鱼，在此基础上再通过标签基因进行第二次筛选，获得标签基因表达个体，从而获得表达目的基因表达个体。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于扬州大学，未经扬州大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201711157630.X/，转载请声明来源钻瓜专利网。
