[发明专利]一种杂交瘤细胞过滤灌流培养制备抗体的方法

摘要

本发明提供一种杂交瘤细胞过滤灌流培养制备抗体的方法，包括以下步骤：步骤1：使用无钙镁离子ThermoFisher无血清杂交瘤培养基浸泡过夜；步骤2：超净台中2e7杂交瘤细胞悬浮于60‑100ml无血清培养基中；步骤3：消毒浸泡好1g微载体约4.3e6个微球悬浮于60‑100ml无血清培养基中；步骤4：分别吸取微载体和细胞混合入过滤器，实现细胞接种一个微载体；步骤5：持续补料和出液；步骤6：过滤出澄清的抗体培养液收集。本发明方法，解决了杂交瘤染菌安全问题，细胞交叉污染，单抗混杂培养基血清牛抗，灌流方式培养条件适用不同的细胞株，单抗产品生产安全重复性好。

主权项

1.一种杂交瘤细胞过滤灌流培养制备抗体的方法，其特征在于， 包括以下步骤：步骤1：将1g Cytodex1微载体100ml无钙镁离子磷酸盐缓冲液浸泡过夜，上清倾倒换液；121度30分钟高压灭菌后；在超净台中倾倒PB上清，使用无钙镁离子ThermoFisher 无血清杂交瘤培养基浸泡过夜；步骤2：超净台中2e7杂交瘤细胞悬浮于60‑100ml无血清培养基中；步骤3：消毒浸泡好1g微载体约4.3e6个微球悬浮于60‑100ml无血清培养基中；步骤4：分别吸取微载体和细胞混合入过滤器，实现细胞接种一个微载体；步骤5：持续补料和出液，经过循环过滤灌流培养3‑4天，细胞密度达到1‑4e6/ml, 透气袋中的培养基营养成分消耗，乳酸和氨堆积，需要持续向储液透气袋中补充无血清培养基和DMEM/F12混合培养基；过滤灌流出的培养液不再循环回到储液透气袋，通过滤器底部三通阀排出和收集；通过无血清培养基不断淋洗去除原细胞培养体系中的血清，为下一步抗体收集准备；步骤6：6‑7天后滤器中细胞密度1e7/ml, 微载体上细胞已铺满表面，控制维持灌流培养基葡萄糖含量为0.8g/L、乳酸含量<2g/L、氨含量<8mM, 抑制细胞继续扩增，加大抗体分泌，过滤出澄清的抗体培养液收集。