[发明专利]具有化疗药物抗性的通用型CART/TCRT细胞及其构建方法

摘要

本发明属于基因工程与合成生物学领域，具体涉及一种具有化疗药物抗性的通用型CART/TCRT细胞及其构建方法，所述通用型CART/TCRT细胞是具有嵌合抗原受体和T细胞受体的异体T细胞，所述T细胞受体α、β链和脱氧胞苷激酶分子被敲除；所述T细胞受体α、β链和脱氧胞苷激酶分子的敲除技术为CRISPR技术；所述通用型CART/TCRT细胞既保留了肿瘤特异抗原的靶向性，又排除了GvHD和排斥的问题，并减弱对化疗药物Fludarabine和Clofarabine的敏感度，可以作为一种通用型的简易，低成本，高活性CART/TCRT细胞制剂使用。

主权项

1.具有化疗药物抗性的通用型CART/TCRT细胞的构建方法，其特征在于，所述通用型CART/TCRT细胞是具有嵌合抗原受体和T细胞受体的异体T细胞，所述T细胞受体α、β 链和脱氧胞苷激酶分子被敲除；所述T细胞受体α、β 链和脱氧胞苷激酶分子的敲除技术为CRISPR技术；采用CRISPR技术所使用的sgRNA和crRNA序列为：sgRNA‑TCRα:AGAGTCTCTCAGCTGGTACA（SEQ ID NO.10）sgRNA‑TCRβ:GCTGTCAAGTCCAGTTCTAC（SEQ ID NO.13）sgRNA‑dCK:TTCCTGAACCTGTTGCCAGA（SEQ ID NO.26）crRNA‑TCRα:ATTCTCAAACAAATGTGTCACAA（SEQ ID NO.36）crRNA‑TCRβ:AGCCATCAGAAGCAGAGATCTCC（SEQ ID NO.40）crRNA‑dCK: TGAATATCCTTAAACAATTGTGTG（SEQ ID NO.47）。