[发明专利]具有化疗药物抗性的通用型CART/TCRT细胞及其构建方法

说明书

本发明属于基因工程与合成生物学领域，具体涉及一种具有化疗药物抗性的通用型CART/TCRT细胞及其构建方法，所述通用型CART/TCRT细胞是具有嵌合抗原受体和T细胞受体的异体T细胞，所述T细胞受体α、β链和脱氧胞苷激酶分子被敲除；所述T细胞受体α、β链和脱氧胞苷激酶分子的敲除技术为CRISPR技术；所述通用型CART/TCRT细胞既保留了肿瘤特异抗原的靶向性，又排除了GvHD和排斥的问题，并减弱对化疗药物Fludarabine和Clofarabine的敏感度，可以作为一种通用型的简易，低成本，高活性CART/TCRT细胞制剂使用。

技术领域

本发明属于基因工程与合成生物学领域，具体涉及一种具有化疗药物抗性的通用型CART/TCRT细胞及其构建方法。

背景技术

嵌合抗原受体T细胞(CART)是目前最有发展前景的肿瘤免疫疗法之一，其基本原理主要是提取患者自身的T细胞，并通过基因和细胞工程手段使其表达特异性嵌合抗原受体，使之能够识别和结合肿瘤细胞表面抗原，从而起到靶向杀伤肿瘤细胞的作用。CAR-T在白血病和淋巴瘤治疗中取得显著的疗效，2017年8月30日，美国食品卫生安全委员会FDA宣布批准诺华CAR-T细胞疗法正式上市，用于治疗复发性或难治性儿童、青少年B-细胞急性淋巴细胞白血病(rALL)，其商品名为Kymriah(tisagenlecleucel)。急性淋巴细胞白血病在15岁以下儿童癌症确诊病例中约占25％，是美国最常见的儿童癌，在我国急性淋巴细胞性白血病占儿童急性白血病的80％，发病率为十万分之一。也可发生于成年人，占所有成年人白血病发病率的20％。

根据美国国家癌症研究所估计，每年约有3100名年龄在20岁以下的患者被诊断为这一疾病，由于我国庞大的人口基数，每年有约10000名儿童和青年罹患急性白血病。有效的治疗选择十分有限，在多次复发或难治性B-细胞急性淋巴细胞白血病儿童及青少年患者中，五年无病生存率低于10％-30％。Kymriah的安全性和有效性在多中心临床试验中得到证实，治疗三个月内的总体缓解率为83％，显示了其卓越的疗效。

除了B细胞急性淋巴细胞白血病，CAR-T在复发或难治性慢性淋巴细胞白血病(rCLL)、复发性或难治性多发性骨髓瘤(rNHL)、和非霍奇金淋巴瘤(NHL)的治疗中也取得了显著的疗效。在一项治疗弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、转化滤泡性淋巴瘤(TFL)、以及原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)这三种非霍奇金淋巴瘤，名为ZUMA-1的2期临床试验中，Kite的CAR-T疗法在客观缓解率(objective response rate)上达到了主要临床终点。在接受单次axicabtagene ciloleucel的输注后，有高达82％的患者出现了缓解。在中位数为8.7个月的随访中，有44％的患者依旧处于缓解期，且有39％的患者处于完全缓解。在BluebirdBio公司进行的一项名为b2121的治疗多发性骨髓瘤的实验中，两个剂量组中100％的患者(n＝6)实现了客观反应；两个患者呈MRD阴性；总体反应率(ORR)为78％。6和4个月随访时，两个患者达到严格意义的完全反应(CR)。