[发明专利]针对淀粉酶BLA的启动子文库及强启动子有效
| 申请号： | 201710956947.3 | 申请日： | 2017-10-16 |
| 公开（公告）号： | CN107699560B | 公开（公告）日： | 2021-08-20 |
| 发明（设计）人： | 张桂敏;卢争辉;沈盼盼;周玉玲;马延和 | 申请（专利权）人： | 青岛蔚蓝生物集团有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12N15/113;C12N15/75;C40B40/06;C40B50/06;C12N9/28 |
| 代理公司： | 北京精金石知识产权代理有限公司 11470 | 代理人： | 强红刚 |
| 地址： | 266100 山东省*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种启动子文库，用于在枯草芽胞杆菌中高效表达淀粉酶BLA，所述文库的探针载体为整合型载体，以避免质粒拷贝数对文库表征的影响，在BLA表达框上下游均有强转录终止子，避免上下游遗传元件对BLA表达的影响，所述文库的构建方法包括寡核苷酸退火，IIs型限制性酶和连接酶同时酶切/酶连。为了提高探针载体整合效率及降低内源性淀粉酶AmyE的背景，在启动子文库转化枯草芽孢杆菌时，使用CRISPR/cas9系统在整合位点处引入DNA双链断裂。转化后涂布于底物平板，对水解圈大的转化子通过96孔板复筛，复筛后较强的转化子再通过摇瓶进一步复筛。经由上述步骤，得到比P43表达BLA更高效的启动子22个，其中7个杂合启动子的强度高于所有出发启动子。 | ||
| 搜索关键词： | 针对 淀粉酶 bla 启动子 文库 | ||
【主权项】：
一种针对淀粉酶BLA的启动子文库，其特征在于，所述的启动子文库包括SEQ ID NO.43、SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.48和SEQ ID NO.49所示核苷酸序列的启动子。
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