[发明专利]NK细胞培养基、培养方法及二者的应用

摘要

本发明提供了一种NK细胞培养基、培养方法及二者的应用，涉及细胞培养技术领域，本发明提供的一组细胞培养基，包括第一培养基、第二培养基和第三培养基，每种培养基包括无血清基础培养基和细胞因子。其中，利用无血清基础培养基可以避免引入外源性物质，降低污染风险，同时，多种细胞因子能够使NK细胞受到信号刺激，活化NK细胞，促进其大量扩增。本发明提供的细胞培养方法，简单高效、成本低、短周期内可大量扩增高质量高纯度的NK细胞，对于临床治疗至关重要。

主权项

1.一种NK细胞的培养方法，其特征在于，所述NK细胞的培养方法为如下步骤：(a)：将浓度为0.6mg/mL的Lymactin‑NK抗体包被在细胞培养瓶中，包被条件为37℃，孵育时间为2h；(b)：采集人源外周血，将采集的外周血转移至50mL离心管中，于20℃温度下2000rmp，10min离心收集血浆备用；使用淋巴细胞分离液分离并收集外周血单个核细胞，收集后的单个核细胞用PBS清洗三次并计数，备用；(c)：取包被好的细胞培养瓶，弃去包被液，使用无血清第一基础培养基重悬步骤(b)提供的外周血单个核细胞，调整细胞浓度至1.5×106/mL，并接种至包被好的细胞培养瓶中；(d)：加入5％自体血浆至培养瓶中，添加第一细胞因子；(e)：细胞培养每3天进行补液，使用无血清第二基础培养基调整细胞密度为1.5×106/mL，补加5％自体血浆及第一细胞因子；(f)：细胞培养至第7天后，每3天进行补液，使用无血清第二基础培养基调整细胞密度为1.5×106/mL，补加第二细胞因子；(g)：细胞培养至第14天，收集细胞，PBS清洗3次，得到NK细胞；其中，所述第一基础培养基和第二基础培养基为无血清培养基；所述第一基础培养基为X‑VIVO 15和AlyS505NK‑AC；所述第二基础培养基为AIM‑V；所述第一细胞因子为白细胞介素‑2、白细胞介素‑15和白细胞介素‑21；所述第一细胞因子的加入量为白细胞介素‑2 1000IU/mL、白细胞介素‑15 20ng/mL和白细胞介素‑21 10ng/mL；所述第二细胞因子为白细胞介素‑2和白细胞介素‑15；所述第二细胞因子的加入量为白细胞介素‑2 1000IU/mL和白细胞介素‑15 20ng/mL。