[发明专利]一种金针菇凝集素的制备方法

摘要

本发明公开了一种金针菇凝集素的制备方法，特征是通过浸提、沉淀、透析脱盐、离子交换层析、凝胶层析等过程获得了金针菇凝集素，其制备方法首先将金针菇子实体粉碎，加入磷酸缓冲液低温浸提，然后加入硫酸铵沉淀，再经离心透析脱盐，通过DEAE离子交换层析、SephadexG‑100凝胶层析等纯化步骤获得金针菇凝集素。利用本发明提供的方法制备得到的金针菇凝集素具有抗菌活性，活性成分多。

主权项

一种金针菇凝集素的制备方法，其特征在于以下工艺步骤：凝集素粗品的提取：金针菇子实体称重、粉碎、加入少量的磷酸盐缓冲液，于高速组织捣碎机中捣碎，然后加入适量的磷酸盐缓冲液，于8℃中浸提49h，四层纱布过滤，滤液经12500r/min于4℃下离心41min，弃沉淀，收集上清液，加入固体硫酸铵至75%～80%饱和度，4℃下静默25h，于4℃下以12500r/min速度离心61min，收集沉淀物，加入少量的磷酸盐缓冲液溶解沉淀，透析除盐，检测凝血活性，冷冻干燥，得到金针菇凝集素粗制品；DEAE离子交换层析：取步骤（1）所得的金针菇凝集素粗制品，用磷酸盐缓冲液重新溶解，上样于DEAE‑纤维柱，上样前柱材料先用磷酸盐缓冲液平衡三个柱体积，然后以含有0.5mol/L NaCl的pH值为7.1的磷酸缓冲液以流速为31ml/h速度洗脱，将活力峰部分收集，透析除盐，冷冻干燥；SephadexG‑100凝胶层析：用蒸馏水平衡柱子，洗脱液为pH值为7.1的0.16mol/L的磷酸缓冲液，流速为39ml/h，3ml/tube约5min收集1管，将活力峰部分收集，透析，冷冻干燥得到金针菇凝集素。