[发明专利]一种金针菇凝集素的制备方法

权利要求书

1.一种金针菇凝集素的制备方法，其特征在于以下工艺步骤：

凝集素粗品的提取：金针菇子实体称重、粉碎、加入少量的磷酸盐缓冲液，于高速组织捣碎机中捣碎，然后加入适量的磷酸盐缓冲液，于8℃中浸提49h，四层纱布过滤，滤液经12500r/min于4℃下离心41min，弃沉淀，收集上清液，加入固体硫酸铵至75%～80%饱和度，4℃下静默25h，于4℃下以12500r/min速度离心61min，收集沉淀物，加入少量的磷酸盐缓冲液溶解沉淀，透析除盐，检测凝血活性，冷冻干燥，得到金针菇凝集素粗制品；

DEAE离子交换层析：取步骤（1）所得的金针菇凝集素粗制品，用磷酸盐缓冲液重新溶解，上样于DEAE-纤维柱，上样前柱材料先用磷酸盐缓冲液平衡三个柱体积，然后以含有0.5mol/L NaCl的pH值为7.1的磷酸缓冲液以流速为31ml/h速度洗脱，将活力峰部分收集，透析除盐，冷冻干燥；

SephadexG-100凝胶层析：用蒸馏水平衡柱子，洗脱液为pH值为7.1的0.16mol/L的磷酸缓冲液，流速为39ml/h，3ml/tube约5min收集1管，将活力峰部分收集，透析，冷冻干燥得到金针菇凝集素。

2.根据权利要求1所述的一种金针菇凝集素的制备方法，其特征在于步骤（1）、（2）所述的磷酸盐缓冲液指的是pH值为7.1的内含0.16mol/L NaCl的0.016mol/L的磷酸缓冲液。

3.根据权利要求1所述的一种金针菇凝集素的制备方法，其特征在于步骤（1）中浸提时的液料比为11:1。

4.根据权利要求1所述的一种金针菇凝集素的制备方法，其特征在于步骤（2）洗脱峰共有5个，其中活力峰指的是第5个洗脱峰。

5.根据权利要求1所述的一种金针菇凝集素的制备方法，其特征在于步骤（3）中将收集到的活力峰经过SephadexG-100分子筛层析后得到4个蛋白峰，其中活力峰指的是第3个蛋白峰。

6.根据权利要求1所述的一种金针菇凝集素的制备方法，其特征在于步骤（3）获得的金针菇凝集素具有抑菌活性，冷冻干燥得到金针菇凝集素。