[发明专利]一种唾液中皮质醇的检测方法

摘要

本发明公开了一种唾液中皮质醇的检测方法，包括样品的处理、样品的准备、浓缩、稀释、显色和测定步骤，测试前30min将样品于20～30℃的条件下解冻，然后用离心机离心，再通过纳米羟基磷灰石改性的氧化石墨烯/聚偏氯乙烯复合微滤膜过滤。本发明通过使用纳米羟基磷灰石改性的氧化石墨烯/聚偏氯乙烯复合微滤膜进行过滤处理，利用唾液中的唾液粘蛋白对羟基磷灰石具有高度的亲和力，使液粘蛋白充分粘附在复合微滤膜上，以充分去除唾液中的唾液粘蛋白，避免唾液粘蛋白对唾液皮质醇检测结果的影响，操作简单，检测结果精确，能够提高对人体疲劳状态把控，并根据疲劳状态及时做出应对措施。

主权项

1.一种唾液中皮质醇的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：1)样品的处理：测试前30min将样品于20～30℃的条件下解冻，然后用离心机离心，再通过纳米羟基磷灰石改性的氧化石墨烯/聚偏氯乙烯复合微滤膜过滤，过滤完成分别用去离子水稀释成0ng/ml、2ng/ml、4ng/ml、8ng/ml、16ng/ml的样品稀释液；2)样品的准备：取包被板设置样品孔格5个，编号Y0、Y2、Y4、Y8、Y16，用移液枪各自移取0ng/ml、2ng/ml、4ng/ml、8ng/ml、16ng/ml的样品稀释液50ul分别加入Y0、Y2、Y4、Y8、Y16孔格，并设置空白孔格5个；3)浓缩：用移液枪吸取50ul的酶结合物分别加入样品稀释液的孔格中，用封板膜覆盖所有孔格，充分振荡1min，然后放入37℃的恒温培养箱中培养40～50min，得到浓缩混合液；4)稀释：将3)中得到的浓缩混合液分别倒入烧瓶中，加入35倍体积的去离子水，充分振荡1min，得到稀释混合液，然后分别用稀释混合液加满包被板上的孔格，静置10min后倒回烧瓶，如此重复10次；5)显色：先用移液枪吸取50ul显色剂A液分别加入样品稀释液的孔格中，再用移液枪吸取50ul显色剂B液分别加入样品稀释液的孔格中，充分振荡1min，于20～30℃的条件下显色10min后，在样品稀释液的各个孔格中分别加入50ul的终止液，其中显色剂A液包括：PBS缓冲液、柠檬酸、ED‑TA乙二氨四乙酸、ProcLin‑300和过氧化氢的混合溶液，显色剂B液包括：PBS缓冲液、柠檬酸、ED‑TA乙二氨四乙酸、ProcLin‑300和硫代硫酸钠的混合溶液；6)测定：以5个空白孔格调零，将包被板放入分光光度计测定样品的吸光度。