[发明专利]一种唾液中皮质醇的检测方法

说明书

本发明公开了一种唾液中皮质醇的检测方法，包括样品的处理、样品的准备、浓缩、稀释、显色和测定步骤，测试前30min将样品于20～30℃的条件下解冻，然后用离心机离心，再通过纳米羟基磷灰石改性的氧化石墨烯/聚偏氯乙烯复合微滤膜过滤。本发明通过使用纳米羟基磷灰石改性的氧化石墨烯/聚偏氯乙烯复合微滤膜进行过滤处理，利用唾液中的唾液粘蛋白对羟基磷灰石具有高度的亲和力，使液粘蛋白充分粘附在复合微滤膜上，以充分去除唾液中的唾液粘蛋白，避免唾液粘蛋白对唾液皮质醇检测结果的影响，操作简单，检测结果精确，能够提高对人体疲劳状态把控，并根据疲劳状态及时做出应对措施。

技术领域

本发明涉及医学检测技术领域，尤其涉及一种唾液中皮质醇的检测方法。

背景技术

疲劳,是劳动过程中劳动者由于生理和心理状态的变化，产生某一个或某些器官乃至整个机体力量的自然衰竭状态。疲劳是一种生理现象，也是一种心理现象，从本质上讲是机体的一种正常生理保护机制。从生物医学理论上讲，劳动是能量消耗的过程，这个过程持续到一定程度，中枢神经系统将产生抑制作用，继中枢神经系统疲劳后，就是反射运动神经系统的疲劳，反映出动作的灵敏性降低，作业效率下降。疲劳发生的原因较多，由过多运动、长时间连续工作、精神紧张、睡眠剥夺、视觉疲劳及其它疾病因素导致。疲劳发生后，人体在生理、生化和代谢方面都存在一些共性改变，尤其是在部队军事训练中，疲劳不仅会影响到训练成绩的提高，过度的疲劳还会损害机体的肌肉系统、心血管系统、神经系统、内分泌系统等多种系统，导致食欲降低、体重下降、睡眠障碍等症状。在日常训练中，持续长时间大强度的训练使得机体难以承受，最终对机体造成严重损伤。

皮质醇作为应激激素，是疲劳反应的重要指标，血液里的皮质醇约80％与皮质类固醇结合蛋白结合，其余呈游离状态。只有游离的皮质醇才具有生物活性。由于唾液中不含结合蛋白，因此唾液皮质醇能很好地反映血中具有生物活性的游离皮质醇。唾液皮质醇和血液皮质醇具有良好的相关性，且唾液采样不像采血那样给人带来心理压力，因此已广泛应用于疲劳、精神、心理研究。

唾液中除了唾液皮质醇，还含有各种有机物与无机物，如唾液粘蛋白等物质，而目前在检测唾液皮质醇前没有对唾液粘蛋白进行处理，或者通过脱脂棉简单的吸附唾液粘蛋白，唾液粘蛋白的去除效果差，影响唾液皮质醇检测结果的准确性。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的是提供一种唾液中皮质醇的检测方法，使用纳米羟基磷灰石改性的氧化石墨烯/聚偏氯乙烯复合微滤膜进行过滤处理，以充分去除唾液中的唾液粘蛋白，提高唾液皮质醇检测结果的准确性。

本发明通过以下技术手段解决上述技术问题：

一种唾液中皮质醇的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)样品的处理：测试前30min将样品于20～30℃的条件下解冻，然后用离心机离心，再通过纳米羟基磷灰石改性的氧化石墨烯/聚偏氯乙烯复合微滤膜过滤，过滤完成分别用去离子水稀释成0ng/ml、2ng/ml、4ng/ml、8ng/ml、16ng/ml的样品稀释液；

2)样品的准备：取包被板设置样品孔格5个，编号Y0、Y2、Y4、Y8、Y16，用移液枪各自移取0ng/ml、2ng/ml、4ng/ml、8ng/ml、16ng/ml的样品稀释液50ul分别加入Y0、Y2、Y4、Y8、Y16孔格，并设置空白孔格5个；

3)浓缩：用移液枪吸取50ul的酶结合物分别加入样品稀释液的孔格中，用封板膜覆盖所有孔格，充分振荡1min，然后放入37℃的恒温培养箱中培养40～50min，得到浓缩混合液；

4)稀释：将3)中得到的浓缩混合液分别倒入烧瓶中，加入35倍体积的去离子水，充分振荡1min，得到稀释混合液，然后分别用稀释混合液加满包被板上的孔格，静置10min后倒回烧瓶，如此重复10次；