[发明专利]一种直接体外诱导人外周血单个核细胞成为复合型抗原非特异性调节性T细胞的方法

摘要

本发明提供了一种直接体外诱导人外周血单个核细胞成为复合型抗原非特异性调节性T细胞的方法，直接利用分离方法简单、来源丰富的人外周血单个核细胞(即PBMCs)，经过能符合临床药品生产质量管理规范(GMP)的简便诱导方法，在短期内将PBMCs诱导并扩增成为包含CD4⁺CD25⁺CD127^dim和CD8⁺CD25⁺CD127^dim两种调节性T细胞在内的复合型Treg。这种复合型Treg纯度高、兼具两种Treg的调节功能、具有抗原非特异性，有广泛应用于致病抗原不明确、难治性T细胞介导的自身免疫性疾病治疗的前景。

主权项

1.一种直接体外诱导人外周血单个核细胞成为复合型抗原非特异性调节性T细胞的方法，其特征在于：步骤包括：S1、从人外周血中分离出外周血单个核细胞PBMCs；S2、将PBMCs重悬于含5～10％AB型人血清或自体血清的AIM‑V CTS培养基，计数细胞总量，加入1:1数量的抗CD3/CD28磁珠和终浓度为500～1000U/ml的rhIL‑2，刺激培养6～7天诱导结束，培养过程中每3天补加一次rhIL‑2；S3、磁场去除抗CD3/CD28的磁珠，计数诱导后所获得的活细胞数量，取少量细胞进行T细胞进行表型和纯度的鉴定；S4、将剩余诱导后的T细胞重悬于含5～10％人血清的AIM‑V CTS培养基，加入终浓度为100～200U/ml的rhIL‑2，培养22～26h以静息诱导后的T细胞，分选活细胞；S5、取部分步骤S4获得的活细胞进行混合淋巴细胞培养，其余细胞用生理盐水重悬。