[发明专利]一种原代牙髓干细胞的制备方法及构建牙髓干细胞库的方法

摘要

一种原代牙髓干细胞的制备方法及构建牙髓干细胞库的方法，利用恒温摇床在特定温度和转速条件下，可以在几分钟时间内将牙髓组织消化好，提取到足够多的具有较好生物学活性的牙髓干细胞，既缩短了牙髓干细胞原代提取的时间，节约了时间成本，可以大规模生产，同时获得的足量牙髓干细胞，能够满足牙髓干细胞在干细胞库的构建以及后期干细胞临床治疗以及再生医学研究领域的使用需求，与常规条件下牙髓组织半消化30min或全消化1h左右对照组相比，DPSCs量无明显统计学差异，但细胞增殖活性明显高于对照组。因此，本方法在DPSCs库的构建过程中可以成批快速进行，缩短了DPSCs原代提取的时间，节约了时间成本，适合于大规模生产。

主权项

一种原代牙髓干细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)牙体收集；(2)牙髓提取：将收集的离体牙进行前处理后提取牙髓；(3)牙髓组织消化及干细胞培养：将提取的牙髓组织置于无菌PBS中，剪碎牙髓组织至1mm2，然后，利用离心管收集牙髓组织，并于常温条件下1000rpm，离心10min，弃上清，滴加3mg/mL I型胶原酶+4mg/mL中性蛋白酶混合酶吹散牙髓组织，I型胶原酶与中性蛋白酶体积比例为1∶1，置于37℃，180rpm恒温摇床环境中进行消化，5‑10min后，滴加血清培养基终止消化，1000rpm条件下，离心处理5min收集组织块及细胞，1mL完全α‑MEM培养基重悬，接种于35mm的无菌培养皿中，于37℃，5％CO2细胞培养箱中进行培养，1d后完全α‑MEM培养基补液2mL，每隔3d更换一次α‑MEM培养基；(4)对牙髓干细胞进行传代处理。