[发明专利]一种白血病的B细胞微小残留检测的方法在审
| 申请号： | 201710570750.6 | 申请日： | 2017-07-13 |
| 公开（公告）号： | CN107267629A | 公开（公告）日： | 2017-10-20 |
| 发明（设计）人： | 雷菁;赵双双;刘慧莹;其他发明人请求不公开姓名 | 申请（专利权）人： | 武汉赛云博生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司31253 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种白血病的B细胞微小残留检测的方法。本发明针对人BCR的可变区V区(variable)设计10条上游引物序列，针对BCR的A、D、M、G基因恒定区(constant)各设计1条下游引物序列，针对BCR的E基因恒定区设计2条下游引物序列，并通过多重PCR扩增出目的序列，目的序列纯化后在产物序列3’末端添加碱基A并与接头序列连接，对含接头的连接产物用测序引物进行PCR扩增，获得扩增产物，经纯化、测序，测序结果与癌细胞RNA扩增产物序列比对。此方法灵敏度高达10‑6，检测覆盖面广，可检测几乎所有的B细胞受体。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 白血病 细胞 微小 残留 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种白血病的B细胞微小残留检测的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)收集样本RNA及癌细胞RNA，经凝胶电泳检测、Nanodrop测定其浓度后保存；(2)分别对样本RNA及癌细胞RNA通过一步RT‑PCR的方法获得多重PCR产物；(3)分别磁珠纯化多重PCR产物，除去多余的引物；(4)在纯化后的多重PCR产物的3’末端添加碱基A，获得具有3’粘性末端A的PCR产物；(5)将具有3’粘性末端A的PCR产物与接头序列相连，获得含接头的连接产物；(6)对含接头的连接产物用测序引物进行PCR扩增，获得扩增产物，经纯化、测序，将样本RNA扩增产物序列与癌细胞RNA扩增产物序列比对。
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