[发明专利]一种纯度为100%的羊肚菌母种的制作方法

摘要

本发明公开了一种纯度为100％的羊肚菌母种的制作方法，涉及羊肚菌母种制备方法领域，包括如下步骤培养基的准备、羊肚菌子实体的准备、培养、菌丝观察和菌丝体提纯后得到菌种，本发明在提纯前进行了菌丝的切片在显微镜下观察，在保证没有其它杂菌菌丝和杂菌孢子后再进行提纯工作，保证了羊肚菌菌种培养100％的纯度。

主权项

一种纯度为100％的羊肚菌母种的制作方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)培养基的准备：A:把空白培养皿高压灭菌后放入超净工作台备用；B：母种培养基高压灭菌，灭好菌后放入超净工作台，开启紫外线灯杀菌，4分钟～5分钟后，关闭紫外线灯；C：打开超净工作台送风模式，在超净工作台里快速把经过步骤B的母种培养基分装到经过步骤A中的空白培养皿里；(2)羊肚菌子实体的准备：把准备好的羊肚菌新鲜子实体放入超净工作台，紫外线杀菌20分钟～30分钟后，关闭紫外线灯，后续步骤待用；(3)培养：开启超净工作台其它工作模式，用手术刀取经过步骤2的羊肚菌菌柄内侧的绿豆粒大小的子实体块，再把子实体块放入经过步骤1中的培养皿的中心位置的培养基中，然后盖上培养皿的盖子用封口膜把培养皿的边缘封好口，在放入生化培养箱培养3～4天，温控制在12℃～18℃，子实体块四周长出菌丝体；(4)菌丝观察：步骤3中得到的菌丝体用接种针挑取一些放到事先准备好的盖玻片上，并加少量无菌水滴在菌丝体上，并用载玻片压实菌丝体后拿到显微镜下，确认是羊肚菌的菌丝体，整个过程要在超净工作台其它工作模式开启下进行；(5)菌丝体提纯：经过步骤4观察后，没有其它杂菌菌丝和杂菌孢子后再进行提纯工作，把高压灭菌好并且凝固的斜面试管培养基放入超净工作台，把培养好的菌丝体放入超净工作台，把其他接种工具放入超净工作台，开启紫外线灯杀菌20分钟～30分钟后关闭，打开超净工作台其它工作模式，把培养皿中从子实体四周长出的菌丝接入凝固试管培养基斜面的中心位置后，用硅胶塞把试管口封严后放人生化培养箱15℃～18℃下培养，7天后试管内的菌丝体长满后，得到羊肚菌母种。