[发明专利]一种基于96孔板的高通量糖基化肽段除盐富集方法

摘要

本发明属于蛋白质糖基化修饰领域，涉及一种利用96孔板对肽段进行高通量除盐和糖基化富集的新方法，其包括：通过离心，样品的肽段溶液在填装C18材料的96孔脱盐板上实现溶液的脱盐和有机相转换，洗脱的高有机相溶液即为ZIC‑HILIC材料的上样溶液，直接进入装填ZIC‑HILIC填料的96孔板中进行富集，富集的洗脱液可以浓缩或者直接进入质谱分析。本发明在富集的过程中，无需浓缩和溶液相转化，减少样品损失。在保持了传统的基于移液枪头的亲水相互作用小柱富集方法高特异性的同时，实现了大规模样本的快速富集，节省了样品处理时间。

主权项

一种基于96孔板的高通量糖基化肽段除盐富集方法，其特征在于，其包括， 将C18材料和ZIC‑HILIC材料分别填入带滤膜的96孔板；在装填C18材料的96孔板中，利用C18材料结合胰酶酶解肽段，对样品进行除盐；将C18除盐的洗脱液直接离心，进入装填ZIC‑HILIC材料的96孔板相应孔道中，利用两性离子亲水相互作用使活化的ZIC‑HILIC材料结合并富集酶解溶液中的糖基化肽段；将糖基化肽段洗脱并进行质谱分析；包括步骤：(1)将C18，ZIC‑HILIC材料分别填到带滤膜的96孔板中；(2)在C18 脱盐板中，每孔加入活化液，离心弃去所有溶液,使得C18材料活化；(3)在C18 脱盐板中，每孔加平衡溶液，离心弃去所有溶液使得C18材料平衡；(4)每孔加入相应的样品，肽段和C18材料结合，离心弃去溶液；(5)每孔加入平衡溶液，离心弃去溶液；(6)在ZIC‑HILIC富集板中每孔加入洗脱溶液，离心弃去使ZIC‑HILIC材料活化；(7)在C18脱盐板中每孔加入洗脱溶液，并将C18脱盐板，ZIC‑HILIC富集板和普通96孔板叠在一起，进行离心，使C18材料的洗脱液与ZIC‑HILIC材料接触后离去；肽段从C18脱盐板中被洗脱下，进入ZIC‑HILIC富集板，ZIC‑HILIC材料抓取溶液中的糖肽，其他非糖肽则被离去；(8)ZIC‑HILIC富集板中每孔加入洗脱溶液，离心弃去，洗去非糖肽；(9)ZIC‑HILIC富集板中每孔加入平衡溶液 ，离心并收集溶液，洗脱下来的即为富集的糖肽，冷冻干燥作后续质谱分析。