[发明专利]一种天然香料物质鼠尾草酸的细胞培养及提取方法

摘要

本发明公开了一种天然香料物质鼠尾草酸的细胞培养及提取方法。此方法主要以组织培养技术对鼠尾草以及迷迭香进行细胞培养，培养阶段主要分为：启动培养，悬浮培养及诱导培养，最后经过诱导培养的细胞团便可用于提取鼠尾草酸。把成型的绿色细胞团用纤维素酶和果胶酶充分搅拌，倒入备制好的乙醇中进行匀浆即获得鼠尾草酸。

主权项

1.一种天然香料物质鼠尾草酸的细胞培养及提取方法，其特征在于该方法依次包括如下步骤：(1)启动培养：配制启动培养基，以MS为基本培养基，附加激素KT0.5‑1mg/L+6BA1‑2mg/L+Naa0.15‑0.25mg/L，+琼脂3.5‑4g/L+蔗糖15‑30g/L，启动培养基配制完成进行外植体获取与接种步骤，选取温室大棚中迷迭香和鼠尾草的顶芽和嫩叶部分为外植体，在流水中冲洗10‑15min，放入0.08％‑0.13％升汞中消毒1‑2min后，取出外植体用无菌水冲洗5‑7次左右，即可接入启动培养基的培养瓶中培养50‑70天，培养温度26‑28度；(2)悬浮培养：配制悬浮培养基，以1/3MS为基本培养基，附加KT0.5‑1mg/L+6BA1‑2mg/L+Naa0.15‑0.2mg/L，+琼脂1.5‑2g/L+蔗糖15‑30g/L，经过上述步骤(1)的培养后，瓶中出现大量愈伤组织，将愈伤组织取出，分割后，放入悬浮培养基培养50‑70天，培养温度26‑28摄氏度，见白色细胞团长满整个瓶子，进入下一步骤；(3)诱导培养：配制诱导培养基，以大量元素2倍的改良MS为基本培养基，附加激素KT0.5‑1mg/L+6BA1‑2mg/L+Naa0.05‑0.1mg/L，+琼脂3.5‑4g/L+蔗糖15‑30g/L，将上述步骤(2)培养的所有白色细胞团转入诱导培养基内培养30‑40天，培养温度29‑31摄氏度，每天光照7‑9小时，见白色细胞团将转化为绿色细胞团，获得绿色细胞团后进入下一步骤；(4)细胞预处理：将上述步骤(3)所得的所有绿色细胞团取出，放入纤维素酶和果胶酶的酶溶液中均匀搅拌进行酶解，15‑25min，温度20‑30摄氏；(5)匀浆提取：在完成上述步骤(4)细胞预处理后的细胞瓶中加入以盐酸调节PH值的乙醇溶液中进行匀浆4‑6min，完成匀浆提取。