[发明专利]一种利用表面羧基修饰磁球制备固定化酶筛选芳香化酶抑制剂的方法

摘要

本发明提供了一种利用表面羧基修饰磁球固定化酶筛选芳香化酶抑制剂的方法。该方法采用表面羧基修饰的磁球为载体，利用EDC/NHS法共价固定化芳香化酶。固定化酶在37℃下的热稳定性以及在4℃下的保存稳定性较游离酶有很大提高，解决了芳香化酶在使用以及保存过程中易失活的弱点，且磁球的引入使得酶在参加反应后通过借助磁场可以快速方便的回收再利用。随后，利用固定化酶对雷公藤植物中各化合物单体进行了潜在抑制剂筛选，在所建筛选体系条件下测试发现雷公藤红素与芳香化酶具有亲和结合能力，其IC50达到23.625μg/mL。该固定化酶在医药研究领域具有很好的应用前景。

主权项

一种利用表面羧基修饰磁球制备固定化酶筛选芳香化酶抑制剂的方法，其特征在于包括如下步骤：步骤一：合成载体的母体四氧化三铁微球，进行表面功能化修饰得表面羧基修饰磁球。步骤二：利用步骤一中的表面羧基修饰磁球作为载体，固定化芳香化酶。步骤三：利用高效液相色谱法检测温孵反应体系中的固定化芳香化酶酶活力。步骤四：建立以液质联用法为检测手段的固定化芳香化酶抑制剂筛选模型。步骤五：利用步骤四中的筛选模型，筛选芳香化酶抑制剂。步骤六：抑制剂抑制效果的评价。