[发明专利]一种用于体外皮肤刺激性检测的重组表皮模型的构建方法

摘要

本发明实施例提供一种用于体外皮肤刺激性检测的重组表皮模型的构建方法，涉及组织工程技术领域，该方法操作简便，工艺稳定，便于规模化生产，产品脂质组成类似于天然人体皮肤，屏障功能完整，方便用于检测化妆品刺激性。该方法包括：步骤一、表皮干细胞分离和大规模培养；步骤二、组织工程表皮构建。

主权项

一种用于体外皮肤刺激性检测的重组表皮模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括如下几个步骤：步骤一、表皮干细胞分离和大规模培养步骤二、组织工程表皮构建（1）表皮干细胞接种：将步骤一中获得的表皮干细胞用胰酶消化液消化，用接种培养基制成密度为1.25×106‑2.5×106个/ml的表皮干细胞分散液，取200μl接种于含有聚碳酸酯滤膜的细胞培养小室中，震荡均匀，在37℃，5% CO2培养箱中孵育20‑30min；所述接种培养液包括：KC基础液中添加L‑谷氨酰胺1.5‑2.0mM/L，表皮生长因子1‑10μg/L、氢化可的松10‑100μg/L、胰岛素2‑20mg/L、BPE 25‑50mg/L、氯化钙0.06‑0.4mM/L；（2）液下培养：将接种后的细胞培养小室转入表皮模型培养模具中，小室外的培养皿中加入新鲜表皮细胞TU培养液，37℃，5% CO2培养箱继续培养24‑48h；所述表皮细胞TU培养液包括：KC基础液中添加L‑谷氨酰胺1.5‑2.0mM/L，表皮生长因子1‑10μg/L、氢化可的松10‑100μg/L、胰岛素2‑20mg/L、BPE 25‑50mg/L、腺嘌呤 10‑50mg/L、转铁蛋白5‑12μg/L、氯化钙0.06‑0.4mM/L；（3）气液面培养：吸去细胞小室中的剩余培养基，小室外添加表皮细胞TA培养液进行气液面培养，37℃ 5% CO2培养箱继续培养8‑12天后可得厚度为100‑150μm；所述表皮细胞TA培养液包括：表皮TU培养液中添加脂质混合物和/或过氧化物酶体增殖物激活受体激活剂GW501516 0.1‑1mM/L、维生素C 30‑50μg/L，氯化钙 2.0‑3.0mM/L。