[发明专利]一种利用改进的叠皿平板法筛选分离硫酸盐还原菌的方法

摘要

本发明涉及一种利用改进的叠皿平板法筛选分离硫酸盐还原菌的方法，该方法首先通过硫酸盐还原菌液体富集培养基对土壤中的微生物进行转接筛选，接着采用改进后的稀释涂布‑叠皿夹层法以及筛选培养基培养菌株，第三步利用普通叠皿双层平板法分离纯化上一步所得菌株，最后在保存培养基中保存培养。该方法克服了现有技术存在的菌液不能均匀地涂布渗透在第一层平板上、菌液稀释后不利于其生长、菌落容易上下重叠甚至出现杂菌生长等不足，具有用材简便、筛选效率高、筛选周期短、所得菌种转化率高等优点。

主权项

一种利用改进的叠皿平板法筛选分离硫酸盐还原菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：(a)将预处理后的土壤加入到硫酸盐还原菌液体富集培养基中进行厌氧培养，所得富集液接种至新的硫酸盐还原菌液体富集培养基中再次进行厌氧培养，转接培养多次后得到富集菌液；(b)将富集菌液稀释成不同浓度，向其中加入L‑半胱氨酸、抗坏血酸和硫酸亚铁铵备用，将筛选培养基倒入培养皿中，待其冷凝后分别将不同浓度的稀释液涂布在平板上，待稀释液渗透后先后两次倒入筛选培养基，冷凝后依次形成第二层、第三层，将培养皿密闭后恒温培养；(c)将灭菌后的筛选培养基倒入培养皿中冷凝备用，挑取步骤(b)第二层菌株生长层中生长明显的黑色单菌，在新配制的平板上划线分离，再将筛选培养基倒入划线分离后的平板上，密封后反复多次分离培养；(d)将划线分离得到的单菌落接种到保存培养基内，恒温培养即得。