[发明专利]一种多信号检测真菌毒素的方法及试剂盒

摘要

本发明公开一种多信号检测真菌毒素的方法，包括：1)真菌毒素与核酸适体的结合作用：真菌毒素核酸适体与其互补序列反应后，加入待测样品，得到混合液A；2)酶切辅助信号放大作用：混合液A与限制性内切酶反应，得到混合液B；3)鸟嘌呤四聚体结构的制备：混合液B与末端脱氧核苷酸转移酶、脱氧核苷三磷酸反应后，与配体分子作用，得到混合液C；4)检测分析：混合液C与不同底物作用发生催化氧化反应，产生紫外、荧光和化学发光信号，根据各信号的响应强度与真菌毒素浓度的关系计算待测样品中真菌毒素的含量。本发明方法操作处理快速简单、检测时间短，具有免标记、低成本、高精准、高灵敏等特点。

主权项

1.一种多信号检测真菌毒素的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)真菌毒素与核酸适体的结合作用：使真菌毒素核酸适体及其互补序列反应，形成杂交双链后，加入待测样品，使其与核酸适体结合，双链解旋，释放互补序列，得到混合液A；2)酶切辅助信号放大：混合液A与限制性内切酶反应，杂交双链被剪切，暴露出3'‑OH，而真菌毒素与适体的结合产物及互补序列单链DNA不发生酶切，得到混合液B；3)鸟嘌呤四聚体结构的制备：混合液B与末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)和脱氧核苷三磷酸(dNTPs)反应，被剪切的杂交双链3'‑OH端可随机聚合富含鸟嘌呤的长链DNA，形成多个连续的鸟嘌呤四聚体结构(G4结构)，之后与配体分子作用，构成具有过氧化物酶活性的脱氧核酶(DNAzyme)，得到混合液C；4)检测分析：混合液C与不同底物作用发生催化氧化反应，产生紫外、荧光和化学发光信号，根据各信号的响应强度与真菌毒素浓度的关系计算待测样品中真菌毒素的含量；其中，所述真菌毒素为赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、T‑2毒素、黄曲霉毒素M1、黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、伏马毒素B1或伏马毒素B2。