[发明专利]革兰氏阴性菌阳性血培养分离胶及化学试剂前处理方法

摘要

一种革兰氏阴性菌阳性血培养分离胶及化学试剂前处理方法，抽取3.5ml血培养阳性液至3.5ml分离胶管中；把分离胶管放置到离心机中，离心机在4000g的离心力的作用下离心10min；在勿碰触分离胶管中的分离胶的表面菌膜的条件下对血培养阳性液进行吸弃上清；将1ml菌悬液转移至1.5mlEP管中，往EP管中加入200μl且浓度百分比为10％的SDS，把EP管放置在涡旋振荡仪上进行涡旋震荡1min后，再在室温的条件下把EP管静置5min；获得的菌悬液通过化学试剂处理后进行直接MALDI‑TOF质谱鉴定，有效避免了现有技术中整个过程耗时长的缺陷。

主权项

一种革兰氏阴性菌阳性血培养分离胶及化学试剂前处理方法，其特征在于，具体步骤如下：步骤1：抽取3.5ml血培养阳性液至3.5ml分离胶管中；步骤2：把分离胶管放置到离心机中，离心机在离心力的作用下离心10min；步骤3：在勿碰触分离胶管中的分离胶的表面菌膜的条件下对血培养阳性液进行吸弃上清；步骤4：用1ml无菌双蒸水反复吹吸分离胶表面的菌膜，以此来让菌膜悬浮在无菌双蒸水中形成菌悬液；步骤5：将1ml菌悬液转移至1.5ml EP管中，往EP管中加入200μl且浓度百分比为10％的SDS，把EP管放置在涡旋振荡仪上进行涡旋震荡1min后，再在室温的条件下把EP管静置5min；步骤6：把EP管放入离心机中，离心机在13000rpm的转速的条件下进行离心2min，在勿触碰EP管底的沉淀的条件下吸弃上清；步骤7：往EP管底的沉淀中加入浓度百分比为75％的乙醇700μl构成第一混合物，然后对该第一混合物进行吹吸混匀；步骤8：接着在室温条件下把该EP管静置10min；步骤9：将EP管放入离心机中，离心机在13000rpm的转速的条件下进行离心2min，在勿触碰EP管底的沉淀的条件下吸弃上清；步骤10：继续让离心机在13000rpm的转速的条件下进行离心1min，在勿触碰EP管底的沉淀的条件下吸弃上清；然后把该EP管放置在生物安全柜中且在室温条件下静置5min，吹干EP管内的物质中的残留乙醇使得残留乙醇完全挥发；步骤11：往EP管底的沉淀中加入15μl且浓度百分比为70％的甲酸来形成第二混合物，然后对第二混合物进行吹吸混匀，再在室温的条件下把EP管静置；步骤12：往EP管中加15μl乙腈来形成第三混合物，然后对第三混合物进行吹吸混匀，再把EP管放入离心机中，离心机在13000rpm的转速的条件下进行离心2min；步骤13：取1μl EP管中的上清滴于靶板，在室温条件下把靶板晾干；加1μlα‑氰基‑4‑羟基肉桂酸(CHCA)基质，把靶板放入Bruker质谱仪中进行质谱分析。