[发明专利]一种在毕赤酵母内表达蛋白的方法在审
| 申请号： | 201710400556.3 | 申请日： | 2017-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN106978434A | 公开（公告）日： | 2017-07-25 |
| 发明（设计）人： | 沈鹤霄;华权高;马峰 | 申请（专利权）人： | 武汉金开瑞生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81 |
| 代理公司： | 北京众达德权知识产权代理有限公司11570 | 代理人： | 刘杰 |
| 地址： | 430206 湖北省武汉市东湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种在毕赤酵母内表达蛋白的方法，包括如下步骤：(1)根据酵母细胞偏爱密码子优化原始T7 RNA聚合酶基因序列；优化后的T7 RNA聚合酶基因序列如SEQ ID NO:1所示；按照优化的序列合成上、下游带酶切位点的T7聚合酶基因片段；(2)将T7 RNA聚合酶基因片段克隆到组成型毕赤酵母表达质粒pGAPZ A中，构建得到pGAPZ A‑RNAP质粒，并转化至毕赤酵母表达菌株，筛选获得稳定表达T7 RNA聚合酶的菌株；(3)将外源基因克隆至表达载体的多克隆位点上，转化至步骤(2)中的稳定表达T7 RNA聚合酶的菌株，以及表达蛋白。本发明在毕赤酵母内使用T7转录系统来表达蛋白，转录效率高，表达蛋白量大，所述方法无需筛选高表达的菌株，耗费时间短。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 酵母 表达 蛋白 方法 | ||
【主权项】：
一种在毕赤酵母内表达蛋白的方法，其特征在于：所述方法包括：(1)根据酵母细胞偏爱密码子优化原始T7 RNA聚合酶基因序列；优化后的T7 RNA聚合酶基因序列如SEQ ID NO:1所示；按照优化的序列合成上、下游带酶切位点的T7聚合酶基因片段；(2)将所述合成的T7 RNA聚合酶基因片段克隆到组成型毕赤酵母表达质粒pGAPZ A中，构建得到pGAPZ A‑RNAP质粒，并转化至毕赤酵母表达菌株，筛选获得稳定表达T7 RNA聚合酶的菌株；(3)将外源基因克隆至表达载体的多克隆位点上，转化至步骤(2)中所得的稳定表达T7 RNA聚合酶的菌株，以及表达蛋白。
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