[发明专利]土壤尿液DNA提取试剂盒及方法

摘要

本发明涉及一种土壤尿液DNA提取提取试剂盒及方法，在本发明的方法中，包括如下步骤：1）DNA提取，用土壤裂解液和蛋白酶K裂解含有尿液的土壤样品，离心分离土壤和上清液，上清液加入结合液，混合后加入硅基DNA吸附材料，分离硅基DNA吸附材料和液体，漂洗硅基DNA吸附材料，洗脱DNA；2）PCR扩增及电泳，将上步纯化的DNA进行PCR扩增，在电泳仪中检测DNA；采用本试剂盒及方法，克服了样品土壤来源的二氧化硅对DNA的吸附，从而减少了不必要的DNA损失，可达到获取高质量、高产量土壤尿液DNA的目的。

主权项

1.土壤尿液DNA提取试剂盒，其特征在于，包括以下试剂：(a)土壤裂解液，其组成成分包括表面活性剂、螯合剂、pH缓冲剂；所述表面活性剂为：十二烷基硫酸钠、十二烷基磺酸钠、月桂酰基肌氨酸钠、聚乙二醇辛基苯基醚、TWEEN 20、TWEEN 40、TWEEN 60、TWEEN 80、NP 40、十六烷基三甲基溴化铵中的一种或两种及以上的混合，所述表面活性剂的质量浓度为1‑100g/L；所述螯合剂为乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸三钾中的一种或两种，所述螯合剂的浓度为1‑100mmol/L；所述pH缓冲剂为Tris‑HCl、Tris‑醋酸、NaH2PO4‑Na2HPO4、KH2PO4‑K2HPO4、醋酸‑醋酸钠、柠檬酸‑柠檬酸钠，所述pH缓冲剂的pH值为7.0‑11；(b)结合液，其组成成分包括表面活性剂、离液盐、pH缓冲剂；所述表面活性剂为：聚乙二醇辛基苯基醚、TWEEN 20、TWEEN 40、TWEEN 60、TWEEN 80、NP 40中的一种或两种及以上的混合，所述表面活性剂的质量浓度为1‑100g/L；所述离液盐为异硫氰酸胍、盐酸胍、硫氰酸钾、高氯酸钠、碘化钾、碘化钠中的一种或两种及以上的混合，所述离液盐的浓度为3‑5mol/L；所述pH缓冲剂为Tris‑HCl、Tris‑醋酸、NaH2PO4‑Na2HPO4、KH2PO4‑K2HPO4、醋酸‑醋酸钠、柠檬酸‑柠檬酸钠，所述pH缓冲剂的pH值为4.5‑7.0；(c)漂洗液，所述漂洗液为70‑80％乙醇；(d)洗脱液，其组分为：10mmol/L Tris‑HCl，0.1mmol/L乙二胺四乙酸二钠，pH 8.0；(e)硅基DNA吸附材料，所述硅基DNA吸附材料为二氧化硅纳米颗粒、硅胶膜、玻璃纤维膜、石英膜、二氧化硅包裹的磁性纳米颗粒中的任意一种。