[发明专利]土壤尿液DNA提取试剂盒及方法

说明书

本发明涉及一种土壤尿液DNA提取提取试剂盒及方法，在本发明的方法中，包括如下步骤：1）DNA提取，用土壤裂解液和蛋白酶K裂解含有尿液的土壤样品，离心分离土壤和上清液，上清液加入结合液，混合后加入硅基DNA吸附材料，分离硅基DNA吸附材料和液体，漂洗硅基DNA吸附材料，洗脱DNA；2）PCR扩增及电泳，将上步纯化的DNA进行PCR扩增，在电泳仪中检测DNA；采用本试剂盒及方法，克服了样品土壤来源的二氧化硅对DNA的吸附，从而减少了不必要的DNA损失，可达到获取高质量、高产量土壤尿液DNA的目的。

技术领域

本发明属于核酸提取纯化技术领域，具体涉及一种土壤尿液DNA提取试剂盒及方法。

背景技术

二氧化硅能在盐和特定pH值条件下可逆的结合DNA，这也是硅珠法、磁珠法、硅胶膜法提取DNA的理论基础；在高浓度离液盐和低pH值条件下，二氧化硅能通过氢键与DNA结合，而蛋白质、脂类、糖类等杂质因不能被结合从而被去除，去除离液盐、提高pH值之后，DNA与二氧化硅之间的相互作用力减弱，DNA从二氧化硅表面释放，从而获得纯化的DNA；土壤中含有大量的二氧化硅成分，因此，对土壤样品进行DNA提取时，需要考虑样品来源的二氧化硅对DNA的结合，一旦DNA与样品来源的二氧化硅发生结合，DNA就会随着土壤固体颗粒物质一起被去除。

尿液中含有一定量的DNA，可以通过多种方法提取DNA，并用于PCR检测、STR分型检测、二代测序分析；但是，尿液中DNA含量较低，尿液浸润土壤后，被土壤吸附的DNA含量更低，要针对土壤尿液进行DNA提取，具有一定难度。

发明内容

本发明为解决上述存在的问题，提供了一种土壤尿液DNA提取试剂盒及方法，其解决技术问题的技术方案是：

土壤尿液DNA提取试剂盒，包括以下试剂：(a)土壤裂解液，其组成成分包括表面活性剂、螯合剂、pH缓冲剂；

所述表面活性剂为：十二烷基硫酸钠、十二烷基磺酸钠、月桂酰基肌氨酸钠、聚乙二醇辛基苯基醚、TWEEN 20、TWEEN 40、TWEEN 60、TWEEN 80、NP 40、十六烷基三甲基溴化铵中的一种或两种及以上的混合，所述表面活性剂的质量浓度为1-100g/L，优选的表面活性剂成分是十二烷基硫酸钠或十二烷基磺酸钠中的一种或两种的混合，优选的表面活性剂质量浓度为1-10g/L；

所述螯合剂为乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸三钾中的一种或两种，所述螯合剂的浓度为1-100mmol/L；

所述pH缓冲剂为Tris-HCl、Tris-醋酸、NaH2PO4-Na2HPO4、KH2PO4-K2HPO4、醋酸-醋酸钠、柠檬酸-柠檬酸钠，所述pH缓冲剂的pH值为7.0-11，优选的pH缓冲剂为Tris-HCl，优选的pH缓冲剂的pH值为7.5-8.5；(b)结合液，其组成成分包括表面活性剂、离液盐、pH缓冲剂；

所述表面活性剂为：聚乙二醇辛基苯基醚、TWEEN 20、TWEEN 40、TWEEN 60、TWEEN80、NP 40中的一种或两种及以上的混合，所述表面活性剂的质量浓度为1-100g/L；

所述离液盐为异硫氰酸胍、盐酸胍、硫氰酸钾、高氯酸钠、碘化钾、碘化钠中的一种或两种及以上的混合，所述离液盐的浓度为3-5mol/L；

所述pH缓冲剂为Tris-HCl、Tris-醋酸、NaH2PO4-Na2HPO4、KH2PO4-K2HPO4、醋酸-醋酸钠、柠檬酸-柠檬酸钠，所述pH缓冲剂的pH值为4.5-7.0；

(c)漂洗液，所述漂洗液为70-80％乙醇；

(d)洗脱液，其组分为：10mmol/L Tris-HCl，0.1mmol/L乙二胺四乙酸二钠，pH8.0；