[发明专利]一种从土壤中特异性分离酸杆菌的方法在审
申请号: | 201710362569.6 | 申请日: | 2017-05-22 |
公开(公告)号: | CN107058107A | 公开(公告)日: | 2017-08-18 |
发明(设计)人: | 李慧;姚飞;杨山;王志瑞;姜勇 | 申请(专利权)人: | 中国科学院沈阳应用生态研究所 |
主分类号: | C12N1/02 | 分类号: | C12N1/02;C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/01 |
代理公司: | 沈阳科苑专利商标代理有限公司21002 | 代理人: | 马驰 |
地址: | 110016 辽*** | 国省代码: | 辽宁;21 |
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摘要: | 本发明将现代分子生物学技术与传统的微生物学培养技术相结合,基于门水平上的特异性引物‑PCR结合改良后的基本培养基平板特异性分离得到传统意义上难培养的酸杆菌的方法。方法为,将样品悬浊液稀释涂布到改良后的基本培养基平板,选择白色单菌落继续采用连续划线平板法纯化,将纯化后的单菌落经液体培养基扩大培养,提取基因组DNA,应用酸杆菌门特异性引物PCR扩增16S rDNA片段,若得到片段大小为1462的阳性扩增产物,即表明筛选得到该样品中的酸杆菌。采用本发明中的门特异性引物扩增结合酸性筛选平板法可以有效地从样品中分离得到可培养地酸杆菌。 | ||
搜索关键词: | 一种 土壤 特异性 分离 杆菌 方法 | ||
【主权项】:
一种从土壤中特异性分离酸杆菌的方法,其特征在于:其为基于门水平上的特异性引物‑PCR结合改良后的基本培养基平板从土壤中特异性分离酸杆菌,将待处理土壤样品悬浊液涂布于pH为3.5~4.5的基本培养基固体平板培养,选择白色单菌落继续采用连续划线平板法纯化,将纯化后的单菌落经液体培养基扩大培养,提取细菌基因组DNA,应用酸杆菌门特异性引物PCR扩增16S rDNA片段,若得到片段大小为1462bp的阳性扩增产物,即表明筛选得到该样品中的酸杆菌;酸杆菌门特异性引物Acido_31F:5‘‑GATCCTGGCTCAGAATC‑3’,Acido_1492R:5‘‑GGTTACCTTGTTACGACTT‑3’。
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