[发明专利]一种纳米载药系统(DOX-RGD-BSA@AuNCs)药物传递和生物成像

摘要

本发明公开了一种纳米载药系统(DOX‑RGD‑BSA@AuNCs)的药物传递和生物成像，本发明将还原剂为牛血清蛋白(BSA)合成的金纳米簇(BSA@AuNC)为载体，通过酰胺化反应将BSA氨基酸中的羧基和RGD的氨基连接在一起，并利用双官能团连接剂SPDP将巯基化的DOX的巯基与BSA的氨基进行交联，制备出具有靶向特异性的纳米载药系统(DOX‑RGD‑BSA@AuNCs)。该纳米载药系统不仅可以针对多种类型的肿瘤细胞发挥作用，而且能够快速靶向识别癌细胞，通过谷胱甘肽(GSH)对连接阿霉素和纳米簇的双硫键的剪切作用将药物释放，能够快速、准确的杀死癌细胞，达到治疗的目的，以在体内外呈现出良好的抗肿瘤作用。

主权项

一种纳米载药系统(DOX‑RGD‑BSA@AuNCs)的药物传递，其特征在于，包括如下步骤：步骤1，金纳米簇(AuNCs@BSA)的制备方法：步骤1.1，量取质量分数为1％的氯金酸溶液1.7mL，加入3.3mL去离子水，得到5mL、10mM氯金酸溶液；步骤1.2，称取250mL BSA，溶解在5mL去离子水中，得到5mL、50mg/mL BSA溶液；步骤1.3，称取20mgNaOH，溶解在0.5mL去离子水中，得到1MNaOH溶液；步骤1.4，将配制好的5ml(10mM)的氯金酸溶液加入到5mL(50mg/mL)的BSA溶液，控温37℃，剧烈搅拌5min；步骤1.5，将1MNaOH水溶液加入到上述混合溶液中，并且持续剧烈搅拌上述反应物，控温37℃，持续时间12～24h；步骤1.6，将得到的产物冷却至室温，装进MWCO 100000透析袋中，透析外液用水，维持外界温度4℃，透析12～24h，并用葡萄糖凝胶过柱，以除去多余的BSA，从而得到金纳米簇；步骤2，RGD‑BSA@AuNCs的制备方法：步骤2.1，取2mL金纳米簇加入到8mL PBS缓冲溶液(PH＝7.4,20mM)中，得到金纳米簇溶液；步骤2.2，取4mL金纳米簇溶液，在其中加入15～30mg的EDC，避光条件室温下反应20min；步骤2.3，加入15～20mg的NHS，在避光条件下剧烈搅拌1h，得到混合液；步骤2.4，向上述混合液中加入c(RGD)fk溶液(100uL，10mg/mL)，室温下搅拌反应12～24h；步骤2.5，反应后，将反应溶液装进MWCO 100000透析袋中，透析外液用水，维持外界温度4℃，透析12～24h，并且反应产物用截留量为10kDa的超滤离心管中离心(3000Xg，20min)，去除过量反应物，得到的产物溶于2mL PBS缓冲溶液中，且放置在4℃的冰箱内部保存，得到RGD‑BSA@AuNCs；步骤3，DOX‑RGD‑BSA@AuNCs的制备方法：步骤3.1，将制得的RGD‑BSA‑AuNCs和1.5mg的SPDP加入到含有1mM EDTA的PBS缓冲溶液中，室温下反应4h，得到的反应产物装进MWCO100000透析袋中，透析外液用水，维持外界温度4℃，透析12～24h，得到RGD‑BSA@AuNCs；步骤3.2，将盐酸阿霉素(1.5mg，2.6×10‑6mol)和2‑亚氨基硫烷盐酸盐(0.36mg，0.36×10‑6mol)的混合物加入到含有1mM EDTA的PSB缓冲液中，室温下反应4h，得到DOX‑SH(巯基DOX修饰的盐酸阿霉素)；步骤3.3，过量的DOX‑SH和RGD‑BSA@AuNCs反应，得到DOX‑RGD‑BSA@AuNCs溶液；步骤3.4，将步骤3.3中的DOX‑RGD‑BSA@AuNCs溶液加入到PBS缓冲溶液中，然后装进MWCO 100000透析袋中，透析外液用水，维持外界温度4℃，透析12～24h，得到DOX‑RGD‑BSA@AuNCs；步骤4，谷胱甘肽(GSH)的检测：步骤4.1，分别配制2mM、4mM、6mM、8mM、10mM的GSH；步骤4.2，分别取步骤4.1中的GSH 100uL，将其加入到纳米载药系统(DOX‑RGD‑BSA@AuNCs)中，并加入PBS缓冲溶液使得反应体系的总体积为1mL，维持37℃反应4小时；步骤4.3，将反应产物置于截留量为10kDa的超滤离心管进行离心(3000Xg，20min)，并且将分离后的上、下溶液进行荧光检测。