[发明专利]一种水青树的组培繁育方法

摘要

本发明公开了一种水青树的组培繁育方法，属于植物组织培养领域，包括以下步骤（1）外植体的选择及消毒；（2）水青树提取液的制备；（3）初代诱导培养把步骤（1）经消毒的茎段，接种到初代诱导培养基上培养，直至所述茎段长出新芽；（4）继代增殖培养将新芽切割下来，接到继代增殖培养基上培养，直至形成丛生芽；（5）组培苗生根待步骤（4）的丛生芽的单芽长到2.0～3.6cm长时，选取叶片展开的单芽，分割下来接到生根培养基中诱导生根；（6）试管苗的驯化和移栽。该种水青树繁育方法不受季节影响，培育时间短，繁殖速率快，解决了目前水青树扦插成活率低、繁殖周期长、品质退化等问题，实现了水青树良种大规模繁育。

主权项

一种水青树的组培繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）外植体的选择及消毒：从健壮的水青树植株上获取水青树茎段外植体，将茎段先用灭菌净600倍液消毒25～35min，无菌水清洗2～4次，再用0.1%升汞，2～5滴吐温80，处理3～5min，无菌水清洗2～4次，消毒后备用；（2）水青树提取液的制备：取适量新鲜嫩绿的水青树叶片加入到开放的提取罐中，加入水加热到煮沸状态煎煮2‑3h，且叶片与水的料液体积比为1:3‑5，之后倒出提取液至液体存储罐中；再向提取罐中加入水加热到煮沸状态煎煮2‑3h，且叶片与水的料液体积比为1:3‑5，倒出提取液至同一液体存储罐中，最后浓缩液体存储罐中的提取液，使其比重为1.12，得水青树提取液；（3）初代诱导培养：把步骤（1）经消毒的茎段，接种到初代诱导培养基上，经过12～20d的培养，直至所述茎段长出新芽，其中初代诱导培养基为1/2MS+水青树提取液0.6～1.0g/L+6‑BA 0.04～0.08g/L+NAA 0.02～0.06g/L+蔗糖15～25g/L+营养液2.0～6.0g/L；（4）继代增殖培养：待所述新芽在初代诱导中培养20d后，将新芽切割下来，接到继代增殖培养基上培养，在增殖培养基培养10～20d，就会形成丛生芽，所述的增殖培养基为1/2MS+水青树提取液0.8～1.2g/L+6‑BA 0.06～0.08g/L+NAA 0.04～0.06g/L+蔗糖20～30g/L+琼脂2.0～6.0g/L；（5）组培苗生根：待步骤（4）的丛生芽的单芽长到2.0～3.6cm长时，选取叶片展开的单芽，分割下来接到生根培养基中诱导生根，在生根培养基中培养15～25d，茎基部诱导出根，所述的生根培养基为1/4MS+水青树提取液0.3～0.7g/L+IBA 0.02～0.04g/L+NAA 0.01～0.03g/L+蔗糖10～20g/L+琼脂2.0～4.0g/L；（6）试管苗的驯化和移栽：将水青树生根试管苗从培养室移至塑料大棚放置6～10d后，去瓶盖炼苗4～6d，然后从瓶内取出水青树幼苗，用水轻轻洗净培养基，将待栽的水青树幼苗根部用0.1％多菌灵处理1～2min后，将幼苗移栽入穴盘中的栽培基质内，覆膜保湿4～6d，其间上午及下午各通风透气一次，每次20～30min，遮荫65‑75%，一周后完全揭除塑料薄膜小拱棚，喷施1000倍液的甲基托布津，且按照10g/m2的用量进行喷施，此后进行正常的栽培管理，即可。