[发明专利]一种水青树的组培繁育方法

权利要求书

1.一种水青树的组培繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）外植体的选择及消毒：从健壮的水青树植株上获取水青树茎段外植体，将茎段先用灭菌净600倍液消毒25～35min，无菌水清洗2～4次，再用0.1%升汞，2～5滴吐温80，处理3～5min，无菌水清洗2～4次，消毒后备用；

（2）水青树提取液的制备：取适量新鲜嫩绿的水青树叶片加入到开放的提取罐中，加入水加热到煮沸状态煎煮2-3h，且叶片与水的料液体积比为1:3-5，之后倒出提取液至液体存储罐中；再向提取罐中加入水加热到煮沸状态煎煮2-3h，且叶片与水的料液体积比为1:3-5，倒出提取液至同一液体存储罐中，最后浓缩液体存储罐中的提取液，使其比重为1.12，得水青树提取液；

（3）初代诱导培养：把步骤（1）经消毒的茎段，接种到初代诱导培养基上，经过12～20d的培养，直至所述茎段长出新芽，其中初代诱导培养基为1/2MS+水青树提取液0.6～1.0g/L+6-BA 0.04～0.08g/L+NAA 0.02～0.06g/L+蔗糖15～25g/L+营养液2.0～6.0g/L；

（4）继代增殖培养：待所述新芽在初代诱导中培养20d后，将新芽切割下来，接到继代增殖培养基上培养，在增殖培养基培养10～20d，就会形成丛生芽，所述的增殖培养基为1/2MS+水青树提取液0.8～1.2g/L+6-BA 0.06～0.08g/L+NAA 0.04～0.06g/L+蔗糖20～30g/L+琼脂2.0～6.0g/L；

（5）组培苗生根：待步骤（4）的丛生芽的单芽长到2.0～3.6cm长时，选取叶片展开的单芽，分割下来接到生根培养基中诱导生根，在生根培养基中培养15～25d，茎基部诱导出根，所述的生根培养基为1/4MS+水青树提取液0.3～0.7g/L+IBA 0.02～0.04g/L+NAA 0.01～0.03g/L+蔗糖10～20g/L+琼脂2.0～4.0g/L；

（6）试管苗的驯化和移栽：将水青树生根试管苗从培养室移至塑料大棚放置6～10d后，去瓶盖炼苗4～6d，然后从瓶内取出水青树幼苗，用水轻轻洗净培养基，将待栽的水青树幼苗根部用0.1％多菌灵处理1～2min后，将幼苗移栽入穴盘中的栽培基质内，覆膜保湿4～6d，其间上午及下午各通风透气一次，每次20～30min，遮荫65-75%，一周后完全揭除塑料薄膜小拱棚，喷施1000倍液的甲基托布津，且按照10g/m²的用量进行喷施，此后进行正常的栽培管理，即可。

2.根据权利要求1所述的一种水青树的组培繁育方法，其特征在于，所述初代诱导培养基为1/2MS+水青树提取液0.8g/L+6-BA 0.06g/L+NAA 0.04g/L+蔗糖20g/L+营养液4.0g/L。

3.根据权利要求2所述的一种水青树的组培繁育方法，其特征在于，所述营养液包括以下组份及其对应的浓度：

硫酸铵0.2～0.4g/L、二水氯化钙0.1～0.3g/L、七水硫酸镁0.1～0.3g/L、无水磷酸二氢钾0.4～0.6g/L、硫酸锌0.1～0.3g/L、碘化钾0.2～0.4mg/L。

4.根据权利要求1所述的一种水青树的组培繁育方法，其特征在于，所述的增殖培养基为1/2MS+水青树提取液1.0g/L+6-BA 0.07g/L+NAA 0.05g/L+蔗糖25g/L+琼脂4.0g/L。

5.根据权利要求1所述的一种水青树的组培繁育方法，其特征在于，所述的生根培养基为1/4MS+水青树提取液0.5g/L+IBA 0.03g/L+NAA 0.02g/L+蔗糖15g/L+琼脂3.0g/L。

6.根据权利要求1所述的一种水青树的组培繁育方法，其特征在于，所述初代诱导培养、继代增殖培养以及组培苗生根的培养条件：环境温度25±2℃，光照时间12～16h/d，光照强度为1600～2000lx。