[发明专利]一种水青树的组培繁育方法

说明书

技术领域

本发明属于植物组织培养领域，具体涉及一种水青树的组培繁育方法。

背景技术

水青树，稀有种。水青树科落叶乔木，第三纪古老孑遗珍稀植物，分布于陕西南部、甘肃东南部、四川中南部和北部等地，生于海拔1100～3500米处的常绿、落叶阔叶林中或林缘。分布于中国的陕西、甘肃、湖北、四川、贵州、云南等省及印度的北部、缅甸北部、尼泊尔和不丹。水青树的木材无导管，对研究中国古代植物区系的演化、被子植物系统和起源具有重要科学价值，是国家二级保护树种。

以往水青树苗木培育技术主要有二种，一是种子培育，即在水青树种子成熟期，从水青树上采摘果实，把果实经地过去皮处理，得到种子，然后通过对种子适当的处理进步播种催芽培育苗木；其二是扦插繁育，即从水青树上采摘半木质化的穗条，用激素处理穗条后，把穗条插入适当的基质中培育苗木。

水青树苗木的培育主要依靠种子繁育实生苗。但种子繁育苗木存在如下缺点，一是种子育苗季节性强，一年一茬，种子保存时间不长，半年之后发芽率大幅下降；二是经科学选育的良种一般种子都很少，难以满足生产应用的需求，而营建种子园投资大，周期长；三是种子培育苗木不能培育无性系，生产上林份分化大，林相参差不齐，对经过选择表现优良的单株，无法实现规模利用。

水青树扦插繁育的缺点是，一是老树穗条成活率低，因此需要营建扦插用的采穗圃，经过修剪矮化，培育合适的冠形，多产穗条。采穗圃需要精细化管理，必须投入大量的人工，在劳动力成本日渐高涨的今日，采穗圃管理成本难以承受；二是采穗母株容易老化，使用周期不长，3-5年后即要淘汰；三是扦插成活率受天气、管理、基质、生根素等诸多因素的影响，往往成活率难以保证；四是苗木价格偏高，市场难以接受。

因为水青树作为稀有濒危物种，保存其原有的优良性状是非常重要的，因此研究水青树无性系组培繁育的新技术有非常重要的意义。

发明内容

本发明的目的提供一种水青树的组培繁育方法，该种水青树繁育方法不受季节影响，培育时间短，繁殖速率快，解决了目前水青树扦插成活率低、繁殖周期长、品质退化等问题，实现了水青树良种大规模繁育。

为了达到上述目的，本发明通过以下技术方案来实现的：

一种水青树的组培繁育方法，按照以下步骤进行：

（1）外植体的选择及消毒：从健壮的水青树植株上获取水青树茎段外植体，将茎段先用灭菌净600倍液消毒25～35min，无菌水清洗2～4次，再用0.1%升汞，2～5滴吐温80，处理3～5min，无菌水清洗2～4次，消毒后备用；

（2）水青树提取液的制备：取适量新鲜嫩绿的水青树叶片加入到开放的提取罐中，加入水加热到煮沸状态煎煮2-3h，且叶片与水的料液体积比为1:3-5，之后倒出提取液至液体存储罐中；再向提取罐中加入水加热到煮沸状态煎煮2-3h，且叶片与水的料液体积比为1:3-5，倒出提取液至同一液体存储罐中，最后浓缩液体存储罐中的提取液，使其比重为1.12，得水青树提取液；

（3）初代诱导培养：把步骤（1）经消毒的茎段，接种到初代诱导培养基上，经过12～20d的培养，直至所述茎段长出新芽，其中初代诱导培养基为1/2MS+水青树提取液0.6～1.0g/L+6-BA 0.04～0.08g/L+NAA 0.02～0.06g/L+蔗糖15～25g/L+营养液2.0～6.0g/L；

（4）继代增殖培养：待所述新芽在初代诱导中培养20d后，将新芽切割下来，接到继代增殖培养基上培养，在增殖培养基培养10～20d，就会形成丛生芽，所述的增殖培养基为1/2MS+水青树提取液0.8～1.2g/L+6-BA 0.06～0.08g/L+NAA 0.04～0.06g/L+蔗糖20～30g/L+琼脂2.0～6.0g/L；

（5）组培苗生根：待步骤（4）的丛生芽的单芽长到2.0～3.6cm长时，选取叶片展开的单芽，分割下来接到生根培养基中诱导生根，在生根培养基中培养15～25d，茎基部诱导出根，所述的生根培养基为1/4MS+水青树提取液0.3～0.7g/L+IBA 0.02～0.04g/L+NAA 0.01～0.03g/L+蔗糖10～20g/L+琼脂2.0～4.0g/L；