[发明专利]一种烟草及烟草制品中烟碱旋光异构体的正相液相色谱-串联质谱检测方法

摘要

一种烟草及烟草制品中烟碱旋光异构体的正相液相色谱‑串联质谱检测方法，是用NaOH溶液‑正己烷提取烟叶中的烟碱，采用手性色谱柱实现烟碱旋光异构体的分离，柱后高压输液泵引入异丙醇并进行分流，结合串联质谱分析，实现了烟草及烟草制品中S‑(‑)‑烟碱和R‑(+)‑烟碱的分离及灵敏检测。本发明的特点及有益效果如下：采用柱后高压输液泵引入异丙醇并分流，减少了进入质谱的非极性溶剂的量，同时补偿了极性溶剂异丙醇的量，提高了离子化效率，从而满足了液相色谱串联质谱分析的要求，并提高了分析的灵敏度；与现有方法相比，本发明两种烟碱旋光异构体的色谱分离度高（保留时间相差1min）；分析时间短（仅需17min）。

主权项

1.一种烟草及烟草制品中烟碱旋光异构体的正相液相色谱‑串联质谱检测方法，其特征在于：是用NaOH溶液‑正己烷提取烟叶中的烟碱，采用手性色谱柱实现烟碱旋光异构体的分离，柱后高压输液泵引入异丙醇并进行分流，结合串联质谱分析，实现烟草及烟草制品中S‑(‑)‑烟碱和R‑(+)‑烟碱的分离及灵敏检测, 具体步骤如下：a、样品前处理：准确称取0.1~0.3 g烟丝，置于50 mL具塞三角瓶中，加入1~5 mL 5.0%NaOH溶液，静置5~30 min，准确加入含有内标的正己烷溶液10~50 mL，超声萃取5~30 min，取上层清液过有机相滤膜，有机相滤膜上加有1~3.0 g无水硫酸钠，净化后的样品溶液进正相液相色谱‑串联质谱分析；b、样品分析：液相色谱条件：采用正相液相色谱‑串联质谱分析，所用色谱柱为大赛璐手性色谱柱CHIRALPAK^® IC，规格为4.6 mm×250 mm，i.d. 5 µm；柱温：30 ^oC；流动相A：含有碱性添加剂的正己烷，流动相B：异丙醇；等度洗脱，条件为A: B = 95：5；流速1.0 mL/min；进样体积10 μL，分析时间为17 min；所述碱性流动相添加剂为二乙胺，添加量为正己烷质量的0.02%~0.2%；柱后加入异丙醇及分流：在柱后通过三通阀连接，采用安捷伦高压输液泵引入异丙醇，控制异丙醇流速为0.1~1.0 mL/min；同时，进行柱后分流以减少进入质谱的溶剂量；采用离子源上配置的三通阀进行柱后分流，通过控制PEEK管的长度，控制分流比为1:3~1:5；离子源：电喷雾电离源ESI；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测MRM；电喷雾电压：5000 V；气帘气压力：30 psi；辅助气1压力：70 psi；辅助气2压力：70 psi；离子源温度：550 ^oC；各化合物及内标的保留时间、母离子、子离子、碰撞能量CE及去簇电压DP参见表1：表1：烟碱及内标的保留时间、母离子、子离子、碰撞能量及去簇电压分析物保留时间‑minQ1 ‑amuQ3 ‑amuCE ‑eVDP‑VS‑(‑)‑烟碱14.39163.0132.02580R‑(+)‑烟碱15.52163.0132.02580d₃‑烟碱外消旋体14.39/15.52166.0132.02680