[发明专利]一种AAV6型腺相关病毒体外高效感染T细胞的方法在审
| 申请号： | 201710335924.0 | 申请日： | 2017-05-12 |
| 公开（公告）号： | CN107142279A | 公开（公告）日： | 2017-09-08 |
| 发明（设计）人： | 周静;孙秀莲 | 申请（专利权）人： | 山东维真生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/864 | 分类号： | C12N15/864;C12N7/00 |
| 代理公司： | 东莞市华南专利商标事务所有限公司44215 | 代理人： | 刘克宽 |
| 地址： | 250101 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开一种AAV6型腺相关病毒体外高效感染T细胞的方法，具体地使用携带GFP的AAV质粒、pHelper质粒、pRC质粒在助感染试剂VGF‑001的作用下，进行AAV6型腺相关病毒包装，收获病毒后进行纯化、浓缩，将制得的AAV6型腺相关病毒对T细胞进行感染，采用免疫荧光法结合流式细胞术检测细胞的感染效率，结果显示，本发明AAV6病毒体外感染人T细胞，实现了对人T细胞的高效感染，感染效率可达80～90％，甚至更高，这是其他基因转染方法无法比拟的，为T细胞体外研究的学者们解决了一大难题，也为细胞治疗的临床研究打下坚实的基础。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 aav6 相关 病毒 体外 高效 感染 细胞 方法 | ||
【主权项】：
一种AAV6型腺相关病毒体外高效感染T细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)病毒包装：先铺好HEK 293T细胞，待细胞密度达80～90％时换成无血清DMEM培养基，将提前按一定比例混合好的A、B溶液加入到培养基中，继续培养72h后收集病毒，将病毒液进行纯化、浓缩，并检测病毒滴度和纯度，即得病毒液；(2)病毒感染：将T细胞铺于96孔板中，CD3/CD28进行刺激以激活T细胞，待激活后的T细胞密度达70～80％时，加入步骤(1)制得的病毒液，病毒的感染复数MOI为10E6，24h后免疫荧光法结合流式细胞术检测细胞的感染效率。
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- 刘未辰;卢敬;杨曼;高倩;冯力 - 北京安斯晨睿生物科技有限公司
- 2018-06-11 - 2018-10-12 - C12N15/864
- 本发明是一种携带BCMA突变的重组腺相关病毒载体及其构建方法与应用，本发明的AAV/BCMA是在发明人已经成功构建的腺相关病毒载体的骨架中插入BCMA抗原基因得到野生型重组腺相关病毒载体，再通过点突变得到重组腺相关病毒载体。本发明的重组腺相关病毒载体及其衍生产品可用来制备细胞药物，治疗多发性骨髓瘤。
- 一种携带Survivin抗原基因的重组腺相关病毒载体及其构建方法与应用-201510336279.5
- 刘勇;董文娟;高洪吉;史鹏燕 - 深圳益世康宁生物科技有限公司;刘勇
- 2015-06-17 - 2018-10-02 - C12N15/864
- 本发明公开了一种携带生存素(Survivin，又称存活素)抗原基因的重组腺相关病毒载体及其构建方法与其应用。该rAAV载体是将腺相关病毒载体中的腺相关病毒的结构基因替换为Survivin抗原基因得到。本发明的rAAV的病毒载体可将其携带的Survivin抗原基因输送入单核细胞‑树突状细胞系中，被用于刺激免疫系统的效应细胞。实验证明，被本发明的rAAV的病毒载体感染的DC所诱导的CTL在体外或患者体内可有效地抑制Survivin抗原阳性的恶性肿瘤细胞的生长或者杀灭肿瘤细胞。本发明的重组腺相关病毒载体或其相关产品可被用于制备治疗多种Survivin抗原阳性肿瘤的药物。
- 携带MUC-1抗原基因的重组腺相关病毒载体及构建方法与应用-201510336709.3
- 刘勇;李帆;董文娟;冯雪 - 深圳益世康宁生物科技有限公司;刘勇
- 2015-06-17 - 2018-10-02 - C12N15/864
- 本发明公开了一种携带MUC‑1抗原基因的重组腺相关病毒载体及构建方法与应用。该rAAV是将腺相关病毒载体中在已经被删除的腺相关病毒结构基因位置处插入MUC‑1抗原基因得到。本发明的rAAV可将其携带的MUC‑1抗原基因输送入单核细胞‑树突状细胞系中，被用于刺激免疫系统的效应细胞。实验证明，被本发明的rAAV的病毒载体感染的DC所诱导的CTL在体外或患者体内可有效地抑制MUC‑1抗原阳性的恶性肿瘤细胞的生长或者杀灭肿瘤细胞。本发明的重组腺相关病毒载体或其相关产品可被用于制备治疗多种MUC‑1抗原阳性肿瘤的药物。
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