[发明专利]一种在蛹虫草中过表达天蚕素抗菌肽的方法在审
| 申请号： | 201710313228.X | 申请日： | 2017-05-05 |
| 公开（公告）号： | CN107142274A | 公开（公告）日： | 2017-09-08 |
| 发明（设计）人： | 汪滢;鲍大鹏;唐利华;高英女;王莹 | 申请（专利权）人： | 上海市农业科学院 |
| 主分类号： | C12N15/80 | 分类号： | C12N15/80;C12N15/12;C12N1/15 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所31233 | 代理人： | 黄志达,魏峯 |
| 地址： | 201106 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种在蛹虫草中过表达天蚕素抗菌肽的方法，包括利用蛹虫草自身的HSP70启动子构建天蚕素的过表达载体，经过农杆菌介导的转化，转入蛹虫草的菌株中，通过抗性筛选获得转基因菌株。本发明得到的菌株与野生型菌株相比，对原核大肠杆菌和金黄的葡萄球菌有明显的抑菌作用，其具有替代抗生素的潜在利用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 虫草 表达 天蚕 抗菌 方法 | ||
【主权项】：
一种在蛹虫草中过表达天蚕素抗菌肽的方法，包括：(1)收集PDA上蛹虫草菌丝，提取DNA；利用引物扩增得到蛹虫草HSP70基因的启动子片段，将片段构建到PDHt‑bar上，得到载体PDHt‑HSP；(2)合成天蚕素抗菌肽片段，酶切，连接到上述PDHt‑HSP上，得到PDHt‑HSP‑CAD载体；(3)利用上述PDHt‑HSP‑CAD载体转化农杆菌，将蛹虫草孢子和得到的农杆菌菌株共培养，经诱导和筛选得到转基因菌株。
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- 一种可用于丝状真菌基因敲除的载体及应用，其载体由以下方法构建：A、以碱基序列为SEQ ID NO：1所示的(5’‑3’)引物与碱基序列为SEQ ID NO：2所示的(5’‑3’)引物，通过超保真DNA聚合酶，对pBHT2载体质粒进行扩增，得到含TrpC‑Hyp基因的核苷酸片段；B、用Hind III限制性内切酶和Pst I限制性内切酶对pGKO2载体进行酶切，得到线性化的pGKO2载体；再将含TrpC‑Hyp基因的核苷酸片段与线性化的pGKO2载体连接，即得。该载体用于丝状真菌基因敲除，可减少同源重组载体构建的步骤，提高阳性转化子的筛选效率，有利于真菌基因的功能研究和开发。
- 一种双基因共表达重组载体及其构建方法和在三孢布拉霉中的应用-201510491355.X
- 张利平;高新芝;汤晖;李继刚;杨普城 - 河北大学
- 2015-08-12 - 2018-10-30 - C12N15/80
- 本发明公开了一种双基因共表达重组载体，在初始载体中携带有基因表达框序列syn，所述基因表达框序列syn含有：终止子—多克隆位点—双向启动子序列PCarB—TA克隆制备序列—终止子，所述基因表达框序列syn的核苷酸序列如SEQ.ID.NO:1所示；在所述初始载体中还携带有潮霉素抗性基因hygR，所述潮霉素抗性基因hygR的核苷酸序列如SEQ.ID.NO:2；具体构建了一个双基因共表达重组载体pPMPT，为在初始载体pATZ中含有基因表达框序列syn和潮霉素抗性基因hygR，其核苷酸序列如SEQ.ID.NO:3所示，同时还公开了该载体的构建方法以及在丝状真菌三孢布拉霉中的应用。本发明提供的重组载体可在一个质粒上同时添加两个基因，而且通过农杆菌介导可以整合到丝状真菌基因组中，以单拷贝插入，实现双基因共表达，其遗传稳定。
- 由农杆菌介导以吡啶硫胺素为筛选标记的米曲霉转基因体系构建方法-201810526455.5
- 胡志宏;曾斌;孙云龙;牛亚丽 - 江西科技师范大学
- 2018-05-29 - 2018-10-19 - C12N15/80
- 本发明提供了一种由农杆菌介导以吡啶硫胺素为筛选标记的米曲霉转基因体系构建方法，该方法主要包括以下步骤：(1)将植物双元载体改造成含有prtA表达盒的双元表达载体，含有GPDA启动子和GPF报告基因；(2)双元载体转化农杆菌AGL1；(3)在DPY培养基培养野生型米曲霉3.042，3天后洗下孢子；(4)孢子与含有目的载体的农杆菌共培养48小时；(5)共培养后的孢子转移到含有头孢和吡啶硫胺素的CD培养基筛选；(6)筛选培养基生长出来的转化子进一步验证。本发明首次建立了农杆菌介导的以吡啶硫胺素为筛选标记的转基因体系，较原来的原生质体介导的转基因体系减少工作量，提高了转化效率，为米曲霉遗传操作奠定了基础。
- 高表达植酸酶的食药用真菌菌丝饲料添加剂-201510462708.3
- 李海燕;陈欢;李晓薇;李玉;王法微;李晰亮;刘秀明;姚娜;董园园;王南;王琦;王秀然;卢天成;王岩;孙喆;孙天旭 - 吉林农业大学
- 2015-08-01 - 2018-10-16 - C12N15/80
- 本发明公开了高表达植酸酶的食药用真菌菌丝饲料添加剂，通过构建真菌特异性表达植酸酶phyA基因的安全表达载体pCB130NG‑phyA，并转入蛹虫草原生质体，再生获得转基因蛹虫草子实体后，以子实体为母种，培养制得转基因蛹虫草菌丝，PDA液体培养基培养，离心收集菌体，烘干粉碎制得高表达植酸酶的食药用真菌菌丝饲料添加剂，可直接添加于饲料中饲喂动物，不仅能增加动物对磷的利用率，能大大提高养殖动物各期平均日增重和料肉比，促进动物生长，增强动物免疫能力，而且具有无耐药性、改善动物产品品质等优点，而且使磷的排泄量降低了32.14‑56.14％，从而有利于增加养殖效益，降低对环境的污染，应用前景十分诱人。
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