[发明专利]赖氨酸脱羧酶突变体文库构建及高或低活力突变株高通量筛选的方法在审
| 申请号： | 201710312817.6 | 申请日： | 2017-05-05 |
| 公开（公告）号： | CN108796619A | 公开（公告）日： | 2018-11-13 |
| 发明（设计）人： | 陆文强;周豪宏;刘修才 | 申请（专利权）人： | 上海凯赛生物技术研发中心有限公司;凯赛生物产业有限公司 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06;C12Q1/04;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京律智知识产权代理有限公司 11438 | 代理人： | 于宝庆;崔香丹 |
| 地址： | 201203 上海市浦东新*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及生物酶突变体文库构建及高或低活力突变株高通量筛选的方法，具体涉及适用于长度高于2000bp的基因如赖氨酸脱羧酶基因的易错PCR定向进化突变体文库的构建方法及高或低活力突变株高通量筛选的方法。本发明采用易错PCR分段突变、PCR整合、DpnI酶消化、系列pH指示剂指示pH变化的方法，解决了常规易错PCR方法无法有效构建长片段基因突变体文库、连接效率低、pH变化超过指示剂指示范围的难题，为从赖氨酸脱羧酶的突变体文库中筛选出酶活提高或降低的突变株提供了快速、简便的方法。 | ||
| 搜索关键词： | 突变体文库 突变株 赖氨酸脱羧酶 高通量筛选 易错PCR 低活力 构建 基因突变体 指示剂指示 定向进化 连接效率 有效构建 基因 长片段 生物酶 酶活 整合 文库 分段 突变 筛选 消化 | ||
【主权项】：
1.一种大片段基因突变体文库的构建方法，其利用易错PCR进行，其特征在于利用易错PCR分段突变所述大片段基因，然后将分段突变产生的片段化的文库通过PCR整合的方法整合到质粒上，任选地，用DpnI酶消化没有整合片段的质粒，其中大片段基因是指长度大于1500个碱基对的基因，分段突变是指将大片段基因按照其位置分段，并对每一分段进行突变，然后通过PCR整合的方法将各突变片段整合起来，分段的长度为大于500个碱基对小于1500个碱基对，PCR整合是指将含有上述大片段基因的质粒作为模板，将上述各突变分段作为引物，利用PCR的方法扩增整个质粒，以用突变片段替换质粒上基因中对应的未突变片段。
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